带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。（来源：免疫学实习指导——北京大学医学部基础医学院免疫学系）

操作方法

补体介导的细胞毒试验

原理

带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞毒试验可以检查细胞膜抗原，亦可鉴定抗体的特异性。本实验中，Thy-1抗原是小鼠胸腺T 细胞特异的表面抗原，在体外利用抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体通过补体的协同作用，可杀伤95％以上的胸腺细胞。

材料与仪器

小鼠
Hank's液 抗小鼠Thy-1的单克隆抗体 补体 伊红-Y染液
解剖器械 平皿 不锈钢网 试管 吸量管 尖吸管 载玻片 盖玻片

步骤

1.  小鼠胸腺细胞悬液的制备
  将 4～6 周龄小鼠采用颈椎脱臼法处死，取出胸腺放入已加入约4 ml冷Hank's液的平皿中，在100 目的不锈钢网上研磨后，过筛，放入试管，离心1000 rpm，5 分钟，用Hank’s液洗两次。将沉淀的细胞重悬于Hank's液中，配成1×10⁷ /ml细胞悬液。
  2.  取试管3 支，标明顺序，依据下表依次加入1×10⁷ /ml胸腺细胞悬液、抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体（最适稀释度）及Hank's液，放入37 ℃水浴30 分钟。

3.  取出后每管加入1 ％伊红-Y 染液1 滴，混匀，室温放置2 分钟。
  4.  重新混匀后分别在一张载玻片上滴片，加盖玻片镜检。先在低倍镜下观察，再用高倍镜观察，比较3 管中细胞死活情况。

注意事项

1.  胸腺细胞制备速度要快，且需在冰浴中进行操作，以保持细胞活力。

2.  抗Thy-1 的单克隆抗体和补体的效价要在预实验中确定。

3.  细胞对照管死细胞数若超过5％，实验需重新做。

4.  细胞滴加到载玻片上后长时间放置不检测也可导致假阳性反应。

常见问题

一、实验结果  
 

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