本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

操作方法

EB病毒转化成淋巴细胞

材料与仪器

全血
刀豆凝集素A
RPMI 生长培养基 离心管

步骤

1. 混合 10 ml 全血和 10 ml RPMI 生长培养基。

生长培养基（RPMI1640 800 ml，FBS 200 ml，2 mmol/L-谷氨酰胺，5 μg/ml 两性霉素，50 μg/ml 庆大霉素）

2. 取 15 ml 无菌离心管，加 3 ml Histo-paque1077（Sigma），在其上加 4 ml 稀释血，分离淋巴细胞。

3. 室温 300 g 离心 30 分钟，弃上层清亮血浆。

4. 收集不透明淋巴细胞层，细胞悬液倒入 50 ml 无菌离心管。

5. 20 ml RPMI 1640 生长培养基洗两次，室温 300 g 离心 10 分钟。

6. 10 ml 血分离的细胞悬于 1.0 ml 含 EB 病毒的上清。

7. 细胞悬液（1.0 ml）放入 25 cm² 组织培养瓶，垂直放置，37℃ 5% CO₂ 孵育 1~3 小时。

8. 孵育后，加入 3 ml 含 0.2 μg/ml 刀豆凝集素A 的 RPMI 1640 生长培养基，水平放置，使细胞均匀分布于全生长面。

9. 每周加 1 ml 含刀豆凝集素A 的新鲜 RPMI 1640 生长培养基，不要吸出原培养基。

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