抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）是针对细胞核成分的自身抗体，没有器官和种系特异性，ANA 阳性提示患有 SLE 或风湿病等自身免疫性疾病。免疫荧光（immunofluorescence）标记技术，是基于免疫学抗原-抗体特异性反应原理，应用荧光素标记抗原或抗体，检测目的抗原或抗体的方法，常用于组织或细胞抗原或抗体检测，也可用于液相抗原或抗体检测，如免疫荧光抗体技术、流式细胞术等。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中广泛应用。

原理

免疫荧光技术检测血清中抗核抗体实验的基本原理是在生物薄片（Hep-2 细胞 ＋ 灵长类肝脏冰冻切片）上滴加待测血清（大于 1:100 稀释度），血清中的 ANA 能与细胞核抗原成分特异性结合，而未结合游离抗体经洗涤后去除。形成的免疫复合物通过与 FITC 标记羊抗人 IgG 结合，在荧光显微镜下，细胞核显示黄绿色荧光，提示血清中 ANA 的存在。

操作方法

免疫荧光技术检测血清中抗核抗体实验

原理

免疫荧光技术检测血清中抗核抗体实验的基本原理是在生物薄片（Hep-2 细胞＋灵长类肝脏冰冻切片）上滴加待测血清（大于 1:100 稀释度），血清中的 ANA 能与细胞核抗原成分特异性结合，而未结合游离抗体经洗涤后去除。形成的免疫复合物通过与 FITC 标记羊抗人 IgG 结合，在荧光显微镜下，细胞核显示黄绿色荧光，提示血清中 ANA 的存在。

材料与仪器

器材：
① 封片介质和盖玻片、荧光显微镜、待检血清
② 阳性血清（SLE 患者血清）、阴性血清（健康人血清）
③ 生物薄片（分别包被 Hep-2 细胞和猴肝）
试剂：
① 0.05％ Tween20/PBS，pH7.4 洗液
② FITC-羊抗人 IgG 抗体

步骤

免疫荧光技术检测血清中抗核抗体实验的基本过程可分为如下几步：
A. 取一张生物薄片加 1:100 稀释的患者血清 25 μl，室温，30 分钟。
B. 取出生物薄片，以 PBS 冲洗 1 次，PBS 浸泡 5 分钟，滤纸沥干。
C. 加 FITC-羊抗人 IgG 荧光抗体 20 μl，30 分钟，室温。
D. 取出生物薄片洗涤，方法同（2）。
E. 滴加磷酸盐缓冲甘油封片、镜下观察。

注意事项

1 如果背景较深，可采用 0.05％ Tween20-PBS 清洗以去除非特异性结合。

2 添加荧光素标记抗体后应避光操作，防止荧光淬灭。

3 设置阳性和阴性对照组。

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