与琼脂糖凝胶不同，聚丙烯酰胺凝胶灌制时不能加入溴化乙锭，因为此染料会影响丙烯酰胺的聚合。然而，电泳后可用溴化乙锭进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。由于聚丙烯酰胺会猝灭溴化乙锭的荧光，所以检测 DNA 的灵敏度降低。电泳后也可用核酸染料SYBR Gold ( Molecular Probes) 进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

操作方法

聚丙烯酰胺凝胶中DNA的染色检测

原理

与琼脂糖凝胶不同，聚丙烯酰胺凝胶灌制时不能加入溴化乙锭，因为此染料会影响丙烯酰胺的聚合。然而，电泳后可用溴化乙锭进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。由于聚 丙烯酰胺会猝灭溴化乙锭的荧光，所以检测 DNA 的灵敏度降低。电泳后也可用核酸染料SYBR Gold ( Molecular Probes) 进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。它也不能在聚合过程中掺入到凝胶中，这样会妨碍 DNA 的迁移并使 DNA 条带变形。亚甲蓝染色检测的灵敏度低，但较之前两种染料价格低廉，也可选用。

材料与仪器

溴化乙锭溶液 SYBR Gold 贮存液或亚甲蓝贮存液
聚丙烯酰胺凝胶

步骤

一、材料

1. 缓冲液和溶液

染料溶液：溴化乙锭溶液（贮存液 0.5 μg/ml ), SYBR Gold 贮存液或亚甲蓝贮存液（0.001%~0.0025%, TAE 缓冲液配制）

2. 凝胶

聚丙烯酰胺凝胶

二、方法

1. 将凝胶及其附着的玻璃板轻轻地浸入需用染色液中，染色液正好将凝胶没住即可。室温染色 30~45 min。

2. 以玻璃板为支撑物将凝胶从染色液中取出，水冲洗后用一叠 Kimwipes 纸巾蘸去凝胶表面多余的液体。

3. 用一张 Saran Warp 膜覆盖在凝胶上，用梳子宽的一端或折叠的 Kimwipe 纸巾除去 Saran Wrap 膜中的气泡或皱褶。

4. 在紫外透射光源上放一张 Saran Wrap 膜，将凝胶倒置，放在透射光源上，移去玻璃板，凝胶便留在 Saran Wrap 膜上。

5. 凝胶摄影参见方案“琼脂糖凝胶中 DNA 的检测”。

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