了解植物组织中提取蔗糖酶的方法，掌握 Nelson 方法测定蔗糖酶活力的原理。

原理

植物组织中蔗糖酶活力的测定的基本原理是蔗糖酶可将非还原性的蔗糖水解为葡萄糖和果糖，而葡萄糖作为还原糖含有的 自由醛基，在碱性溶液中将 Cu^{2 +}还原, 还原糖本身被氧化成羟酸。碑铜酸试剂与氧化亚铜生 成蓝色复合物（碑铝蓝），在 510 nm 波长下吸收峰与还原糖浓度呈正比，从而确定蔗糖酶的活 力，该法测定的范围为 25〜200 昭。

操作方法

植物组织中蔗糖酶活力的测定

原理

植物组织中蔗糖酶活力的测定的基本原理是蔗糖酶可将非还原性的蔗糖水解为葡萄糖和果糖，而葡萄糖作为还原糖含有的 自由醛基，在碱性溶液中将 Cu2 +还原, 还原糖本身被氧化成羟酸。碑铜酸试剂与氧化亚铜生 成蓝色复合物（碑铝蓝），在 510 nm 波长下吸收峰与还原糖浓度呈正比，从而确定蔗糖酶的活 力，该法测定的范围为 25〜200 昭。

材料与仪器

材料: 植物叶片。
器材：分光光度计，刻度具塞试管，恒温水浴，移液管。
试剂：
①4 mmol • L
- 1
葡萄糖溶液 20 mL
②4 mmol • L
-1
蔗糖溶液 20 mL
③0. 5 mmol • L
-1
蔗糖溶液 200 mL
④0. 2 mol • L
-1
乙酸缓冲液（pH 4.5）200 mL
Nelson 试剂：
⑤A 试剂：100 mL 溶剂中含 Na
2
CO
3
2.5 g,NaHCO
3
2.0 g,Na
2
SO
4
20 g, 酒石酸钾钠 20 g。
⑥B 试剂：100 mL 溶剂中含 CuSO
.
- 5 H
2
O 15 g, 浓 H
2
SO
4
2 滴。以 A : B=50 : 2 的比例混合即可使用，使用前需在 37 °C 以上溶解，防止溶质析出。
⑦碑钳酸试剂：100 mL 中含钥酸铉 5 g, 浓 H
2
SO
4
4. 2 mL, 碑酸钠 0. 6 g。

步骤

植物组织中蔗糖酶活力的测定的基本过程可分为如下几步： 1 . 标准曲线制作： （1）取 9 支具塞试管，按表 49-1 加样。 表 49-1 标准曲线制作加样表 mL

注意事项

1. 酶液的提取过程要尽量在低温条件下进行。

2. 配制葡萄糖标准液时，葡萄糖应在恒温干燥箱中 80°C 下干燥至恒重。

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