在缓冲液中匀浆细胞或组织，继用超声处理。以一定量的细胞悬液与Hoechst33258混匀，测定其荧光。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

操作方法

方案21.3用Hoechst33258测定DNA实验

原理

在缓冲液中匀浆细胞或组织，继用超声处理。以一定量的细胞悬液与Hoechst33258混匀，测定其荧光。

步骤

材料

非无菌：

缓冲液：0.05mol/LNaPO4；2.0mol/L NaCl，pH7.4 , 含 2 X l0^-3 mol/L EDTA 。
Hoechst33258；缓冲液中，100ng/ml 以上的 DNA 用 lug/ml,10~100ng/ml 则用 0.lug/ml。

操作步骤

1. 在缓冲液中用 Potter 匀浆器匀浆细胞，1X 10⁵ 个细胞/ml , 1min。

2. 超声处理 30s。

3. 用 Hoechst 33258 和缓冲液按 1 : 10 稀释细胞。

4. 在 492nm，激发为 356nm 处检测荧光辐射，以小牛胸腺 DNA 作为标准。

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