实验方案(Protocols)

鲑精担体 DNA 制备实验

简介

利用这一方案可获得剪切好的高质量鲑精担体DNA,它可用于转化实验和其他需要高质量担体DNA的实验中。

操作方法

基本方案

材料与仪器

鲑精DNA
TE 酚 氯仿 乙酸钠
离心机 摇床 超声仪

步骤

1.  将TE缓冲液加入装有干燥鲑精DNA的烧杯中,至鲑精DNA浓度为5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反复吹打后,用搅拌棒于4℃搅拌过夜,最终获得一种均匀粘稠液体。 
2.  将一个较大的超声波探头插入烧杯液体中,通过超声波将DNA剪切至2~15 kb(平均7 kb )大小的DNA片段。

3.  用缓冲液平衡酚抽提,将经剪切的鲑精DNA溶液移50 ml 锥形管中,加入等体积缓冲液平衡酚,混匀后于3 000 g 离心5~10 min(或直到清晰地分相为止)。将含有DNA的上相转移到一个干净的试管中。

4.  再用1:1 (v/v)缓冲液平衡酚/氯仿、氯仿分别抽提,然后将含DNA的上相转移到一个适合髙速离心的离心管中。   5.  分别加入1/10体积的3 mol/l 乙酸钠和2.5体积冰冷的无水乙醇,充分混匀后,于约12 000 g 离心15 min。   6.  弃上清,用70%乙醇洗涤沉淀并干燥,DNA以无菌的TE缓冲液重溶至浓度为5~ 10 mg/ml。   7.  于100℃将DNA变性20 min,然后迅速置于冰浴。用微量离心管分装DNA,于-20℃保存,需要时再取出解冻,用于转化实验之前要重新煮沸。


如需了解更多产品详情,请前往阿拉丁官网查询。

https://www.aladdin-e.com

目录: 实验方案(Protocols)
探索主题: DNA 实验

Da — 若无特别说明,分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《鲑精担体 DNA 制备实验》. 阿拉丁知识库,更新于 2024年12月23日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/dna-preparation-of-salmon-sperm-stretche.html
这篇文章对您有帮助吗? Yes No 有 0 人觉得有帮助