细胞生长曲线是了解培养细胞增殖详细过程及细胞生长基本规律的重要手段。

原理

培养细胞生长曲线的绘制的基本原理是通过对培养细胞进行连续的计数，可绘制出细胞的生长曲线，以此确定培养细胞生长是否稳定、细胞增殖速度变化的进程及增殖高峰出现的时间，从而为进行细胞的传代、冻存及进一步利用培养细胞进行科学实验提供最佳处理时间。

操作方法

培养细胞生长曲线的绘制实验

原理

培养细胞生长曲线的绘制的基本原理是通过对培养细胞进行连续的计数，可绘制出细胞的生长曲线，以此确定培养细胞生长是否稳定、细胞增殖速度变化的进程及增殖高峰出现的时间，从而为进行细胞的传代、冻存及进一步利用培养细胞进行科学实验提供最佳处理时间。

材料与仪器

器材：
① 贴壁培养的细胞
② 24 孔培养孔板
③ 吸管
④ 胶帽
⑤ 离心管
⑥ 培养皿
⑦ 半对数坐标纸
⑧ 盖玻片
⑨ 细胞计数板
⑩ 离心机
⑪ 倒置显微镜
⑫ 普通光学显微镜
⑬ 超净工作台
⑭ CO
2
培养箱
试剂:
① D-Hanks 液
② DMEM 培养基（含 10％ 小牛血清）
③ 0.25％ 胰蛋白酶消化液

步骤

培养细胞生长曲线的绘制实验基本过程可分为以下几步：
A. 用 0.25％ 胰蛋白酶溶液消化处于对数生长期的单层培养细胞，收集消化的细胞于 10 mL 离心管中。
B. 800～1000 r/min 离心 5 min，弃上清。
C. 加入 DMEM 培养基（含 10％ 小牛血清），制备单细胞悬液。
D. 吹打均匀后对细胞进行计数。
E. 按 2 x 10⁴～5 x 10⁴ 个/mL 的细胞浓度接种在 24 孔培养孔板内。
F. 每天用胰蛋白酶溶液对其中 3 孔细胞进行消化，以 D-hanks 液稀释，镜下计数。
G. 计算 3 孔培养细胞数的平均值。
H. 连续 7 d 按上述方法消化 3 孔细胞并进行计数，算平均值。

注意事项

1. 接种到培养板孔中的细胞数量应保持每孔一致。接种量应适当，不能过少或过多，过少将使细胞生长周期延长，过多将导致细胞在实验未完成前即需传代，这两种情况下所得到的生长曲线均不能较准确地反映细胞的生长状况。

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