EdU细胞增殖检测试剂盒
EdU细胞增殖检测试剂盒
细胞增殖水平是肿瘤生物学、干细胞研究、再生医学和药物筛选等领域的核心评价指标之一。传统方法如³H-胸苷掺入或BrdU（5-溴-2'-脱氧尿苷）免疫检测，往往存在操作繁琐、需要放射性或强烈DNA变性处理、对细胞结构和抗原性破坏较大等问题。EdU（5-乙炔基-2'-脱氧尿苷，5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）作为胸苷类似物，结合铜催化点击化学技术，为研究者提供了一种灵敏、快速且对样本结构损伤更小的DNA合成检测方案，已逐渐成为细胞增殖分析和细胞周期研究的重要工具。
一、为什么要检测细胞增殖？
细胞增殖本质上反映的是DNA复制与细胞周期推进情况。处于S期的细胞会合成新的DNA，因此S期DNA合成水平是评估细胞增殖最直接的指标之一。典型应用包括：
1.肿瘤学与药物筛选：用于评估抗肿瘤药物或候选化合物对肿瘤细胞增殖抑制作用，配合细胞活力检测试剂可构建多维度药效评价体系。
2.干细胞与再生医学：追踪干细胞的增殖能力、克隆形成能力以及在定向分化、组织再生过程中的细胞增殖模式。
3.发育生物学：分析胚胎发育、器官形成和组织重塑过程中不同区域细胞的增殖分布。
4.毒理学与遗传毒性评价：用于观察化合物是否诱导异常增殖或抑制生理性增殖，配合DNA损伤检测试剂评价潜在遗传毒性。
在上述场景中，研究者需要一种信号稳定、可定量、便于与多色免疫标记联合使用、且对细胞和组织结构破坏尽可能小的增殖检测方法，EdU技术正是围绕这一需求发展起来的。
二、EdU是什么？
EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是胸苷的结构类似物，可在DNA复制阶段被细胞内DNA聚合酶掺入新合成的DNA链，用于标记正在增殖的细胞。其化学特点包括：
1.结构特征：在核苷结构上与胸苷高度相似，仅在嘧啶环上引入了一个末端炔基（–C≡CH），这一炔基为后续点击化学反应提供了特异性反应位点。
2.基本信息：名称为5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU），CAS号61135-33-9，常以冻干粉或DMSO储备液形式提供，可直接配入细胞培养基，标记处于S期的增殖细胞。
三、EdU点击化学检测的基本原理
1.EdU掺入阶段
在细胞培养基中加入一定浓度的EdU（常见起始浓度5–20 μM，10 μM是常用优化起点），细胞在S期进行DNA合成时，会将EdU掺入到新生DNA中，部分替代胸苷。孵育时间视细胞类型和实验目的而定，一般在0.5–2 h之间进行预实验优化。
2.点击反应标记阶段
细胞或组织样本固定、透化后，加入含有荧光叠氮化物的点击反应工作液。EdU分子上的末端炔基与叠氮基团在Cu(I)催化下发生叠氮-炔基环加成反应（CuAAC），形成稳定的三唑环，将荧光团共价连接到含EdU的DNA上。该反应具有：
1）高度特异性和高效性，反应条件温和，一般在室温下即可完成；
2）无需对DNA进行强酸、强碱、高温或酶切变性处理即可实现标记，从而较好地保留细胞核结构和蛋白抗原性。
3.信号检测方式
根据试剂盒配置和实验需求，可采用多种检测模式：
1）荧光显微成像：利用荧光显微镜或共聚焦显微镜观察细胞核内的EdU荧光信号，可直观显示增殖细胞的空间分布；常与Hoechst 33342等核染料或抗体荧光染色联合使用。
2）流式细胞术：采用流式细胞仪定量分析EdU阳性细胞比例，并结合PI、7-AAD等DNA染料进行细胞周期分析，获得G₀/G₁、S、G₂/M各期细胞比例。
3）板式读数：在高通量筛选中，可将荧光信号转换为板式读数，通过酶标仪或高内涵成像系统进行定量分析，适合药物筛选和剂量梯度实验。
四、EdU相较BrdU的优势
1.无需DNA变性处理：点击反应直接识别EdU上的炔基，省去了酸、热或酶变性步骤，样本结构和蛋白抗原性保留更好，适合与多种抗体共染。
2.操作流程简洁：通常仅需“EdU标记–固定–透化–点击反应”四个主要步骤，整体检测时间明显缩短，可在较短时间内完成多组样本检测。
3.信噪比高、灵敏度好：点击化学反应具有高度特异性，背景染色低，荧光团与DNA共价连接使信号更稳定，有利于检测低增殖水平的细胞群体。
4.兼容多种检测平台：可灵活配合荧光显微、流式细胞术、高内涵成像或板式读数使用，便于在同一实验体系中整合细胞增殖、细胞周期和表型标志物信息。
5.非放射性、更安全：相比³H-胸苷等放射性方法，EdU试剂盒更安全、操作要求更简便，适合常规实验室长期使用。
五、典型应用场景
1.抗肿瘤药物筛选与高通量化合物筛查
利用板式EdU试剂盒可在96孔或384孔板中对大量候选化合物进行筛选，通过测定不同处理条件下EdU阳性细胞比例的变化，快速评估其对肿瘤细胞增殖的抑制效果。
2.干细胞增殖与分化研究
EdU可用于检测干细胞在不同诱导或微环境条件下的增殖能力，配合谱系标记或分化标志物免疫染色，可以同时观察“增殖状态+命运决定”的动态变化。
3.发育生物学与组织再生
在体内实验中，可通过给动物注射EdU标记增殖细胞，随后制备组织切片并进行点击反应染色，以绘制胚胎发育、器官形成或损伤修复过程中各组织细胞的增殖分布图。
4.免疫细胞功能与疫苗应答研究
将EdU检测与流式细胞术结合，可定量分析T细胞、B细胞在抗原刺激或疫苗免疫应答过程中的克隆扩增情况；配合表面标志物抗体染色，可进一步区分不同亚群的增殖水平，评价免疫应答质量。
六、阿拉丁相关产品
产品名称 | 货号 | 包装规格 | 试剂盒组分 |
EdU细胞增殖检测试剂盒(AF594) | 50T/100T/200T | EdU(10 mM)；AF594 azide；Click Reaction Buffer；CuSO4；Click Additive；DAPI Staining Solution（1000×） | |
EdU细胞增殖检测试剂盒(6-FAM) | 50T/100T/200T | EdU(10 mM)；6-FAM；Click Reaction Buffer；CuSO4；Click Additive；DAPI Staining Solution（1000×） | |
EdU细胞增殖检测试剂盒(AF647) | 50T/100T/200T | EdU(10 mM)；AF647 azide；Click Reaction Buffer；CuSO4；Click Additive；DAPI Staining Solution（1000×） | |
EdU细胞增殖检测试剂盒(AF488) | 50T/100T/200T | EdU(10 mM)；AF488 azide；Click Reaction Buffer；CuSO4；Click Additive；DAPI Staining Solution（1000×） |
Jurkat (human T-cell leukemia) cells were treated with 10 µM EdU (E131265) for 2 hours and detected according to the recommended staining protocol. The incorporated EdU was then conjugated to Alexa Fluor 488 azide via a click reaction and analyzed by flow cytometry using 488 nm (for Alexa Fluor 488) and 405 nm (for DAPI) excitation.
(A) Histogram of EdU-Alexa Fluor 488 signal, distinguishing EdU-positive S-phase cells from cells in other cell cycle phases.
(B) DNA content histogram (DAPI) resolving the G0/G1, S, and G2/M populations.
(C) Dot plot of EdU incorporation versus DNA content, allowing for direct quantification of S-phase cells.
Flow Cytometry: EdU Cell Proliferation Detection Kit (AF488)(E1373491)
Jurkat (human T-cell leukemia) cells were treated with 10 µM EdU (E131265) for 2 hours and detected according to the recommended staining protocol. The incorporated EdU was then conjugated to Alexa Fluor 647 azide via a click reaction and analyzed by flow cytometry using 640 nm (for Alexa Fluor 647) and 405 nm (for DAPI) excitation.
(A) Histogram of EdU-Alexa Fluor 647 signal, distinguishing EdU-positive S-phase cells from cells in other cell cycle phases.
(B) DNA content histogram (DAPI) resolving the G0/G1, S, and G2/M populations.
(C) Dot plot of EdU incorporation versus DNA content, allowing for direct quantification of S-phase cells.
Flow Cytometry: EdU Cell Proliferation Detection Kit (AF647)(E1373493)
EdU细胞增殖检测试剂盒以胸苷类似物掺入和铜催化点击化学为核心原理，在不需强烈DNA变性处理的前提下，实现了对新合成DNA的高灵敏、稳定标记，显著改善了传统BrdU及放射性方法在操作复杂性和样本破坏性方面的不足。配合针对细胞培养、组织切片、流式检测和高通量筛选等不同应用场景优化的试剂盒配方（包括预制EdU标记液、点击反应工作液、荧光叠氮染料和DNA染料等），研究者可以在肿瘤药物筛选、干细胞与再生医学、发育生物学、免疫学及毒理学等多个领域，快速、准确地获取细胞增殖及细胞周期信息。随着多色流式、高内涵成像以及联合组学技术的普及，EdU将进一步作为基础信号读出之一，与各种抗体、荧光探针和功能试剂协同使用，为解析细胞命运和增殖调控机制提供更丰富、更可靠的实验工具。
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