细胞分裂指数是指培养细胞中分裂细胞在全部细胞中所占的比例。

原理

细胞分裂指数测定的基本原理是通过分裂指数检测培养细胞的增殖能力。在计算细胞的分裂时，一般要求观察的细胞数在 1000 个以上。

操作方法

细胞分裂指数的测定实验

原理

细胞分裂指数测定的基本原理是通过分裂指数检测培养细胞的增殖能力。在计算细胞的分裂时，一般要求观察的细胞数在 1000 个以上。

材料与仪器

器材：
① 贴壁培养的细胞
② 24 孔培养孔板
③ 吸管
④ 胶帽
⑤ 离心管
⑥ 培养皿
⑦ 盖玻片
⑧ 酒精棉球
⑨ 酒精灯
⑩ 离心机
⑪ 倒置显微镜
⑫ 普通光学显微镜
⑬ 超净工作台
试剂:
① D-Hanks 液
② DMEM 培养基（含 10％ 小牛血清）
③ 0.25％ 胰蛋白酶消化液
④ 吉姆萨染液

步骤

细胞分裂指数的测定实验基本过程可分为以下几步：
A. 用胰蛋白酶消化处于对数生长期的单层培养细胞，收集细胞于 10 mL 离心管中。
B. 800～1000 r/min 离心 5 min，弃上清。
C. 加入 DMEM 培养基（含 10％ 小牛血清），制备单细胞悬液。
D. 吹打均匀后对细胞进行计数。
E. 将细胞按 2x10⁴～5x10⁴ 个/mL 的细胞浓度接种于置有盖玻片的培养皿中。
F. 每 24 h 取出 1 张盖玻片，经 95％ 乙醇固定 5 min。
G. 用吉姆萨染液对盖玻片上的细胞染色 10 min。
H. 在显微镜高倍物镜下，通过观察细胞结构，对分裂期细胞及非分裂期细胞加以识别。
I. 选出细胞密度高、中、低 3 个不同的区域，每一区域观察 1000 个细胞，统计并记录其中的分裂细胞数。
J. 计算上述 3 个区域的分裂细胞数平均值。
K. 求出分裂细胞在 1000 个细胞中所占的比例，即可得培养细胞在不同时相点的分裂指数。
L. 以各时相点为横坐标，各时相点时细胞的分裂指数为纵坐标，绘制培养细胞分裂指数曲线。

注意事项

1. 接种到每一盖片上的细胞量也需保持一致；因接近或将完成的分裂细胞易同未分裂的细胞相混淆，故需作特别仔细的观察，通过制定统一的划分标准，这样才能减少误差的产生。

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