简介

蛋白质的精确分子量是指分子中含有的全部原子量的总和。目前，用于测定蛋白质精确分子量的方法主要有一种：质谱法测定蛋白质精确分子量。

原理

质谱法测定蛋白质精确分子量的基本原理是使蛋白质和基质分子在离子源中发生电离，将基质的质子转移到蛋白质，生成不同荷质比的带正电荷离子，经加速电场的作用，形成离子束，进入质量分析器。在质量分析器的电场和磁场中，离子束发生相反的速度色散、聚焦而得到质谱图，从而确定蛋白质分子的质量。

操作方法

质谱法测定蛋白质精确分子量

材料与仪器

器材：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
试剂：
①超纯水
②基质缓冲液，含 50% 乙腈、0.1% 三氟乙酸
③饱和基质液(饱和α-氰-4-羟基肉桂酸)

步骤

质谱法测定蛋白质精确分子量基本过程可分为如下几步，本方法以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱为例介绍质谱法测定技术的全过程。

A. 将纯化蛋白经超纯水透析去除盐成分后， 真空冷冻干燥成蛋白质干粉。

B. 以超纯水或者基质缓冲液，含 50% 乙腈、0.1% 三氟乙酸， 溶解蛋白质干粉并稀释至 0.1-10pmol /μl 。

C. 选择合适的校准蛋白标准品混合分子， 其分子量范围应涵盖待测样品分子质量。

D. 将蛋白样品液与饱和基质液(饱和α-氰-4-羟基肉桂酸)以 1 : 1 的比例混合均匀。

E. 取上述混合液 1μl 加于样品靶上，空气干燥。

F. 将含有蛋白标准品和样品蛋白的样品靶放入 MALDI-TOF-MS 质谱仪，选择合适的测试方法获得质谱图与蛋白分子量。比较所测得的目的蛋白分子的精确分子量与根据蛋白质氨基酸序列推导的相对分子量的差异。

注意事项

1. 不同的蛋白质分子其最佳检测浓度会有所差异。普通蛋白样品，其浓度应控制在 0.1~10mmol/L； 而一些糖蛋白，浓度大于 10mmol/L 时检测效果较好；对于分子量大于 50kDa 的蛋白质，浓度超过 100 mmol/L 才会得到较好的检测结果。

2. 纯化蛋白质必须经过脱盐处理，以除去干扰结晶和离子化的组分。一些污染物如 EDTA、甘油、叠氮钠和去污剂等都能干扰检测的灵敏度。

3. 根据蛋白质的分子量选择合适的基质，常用的基质有芥子酸，适合于大于 10kDa 的蛋白质或多肤；α-氰-4-羟基肉桂酸适合于小于10kDa 的蛋白质或多肤；5- 二起基苯甲酸 (2 ， 5-dihydroxybenzoic acid) 适于大于 3kDa 的多肽及一些糖蛋白的分析。

如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。

https://www.aladdin-e.com