硝态氮是植物最重要的氮源，植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供应情况，因此常作为施肥指标。菜叶和根菜中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害人体健康，因此，硝酸盐含量又成为鉴定蔬菜及其加工品品质的重要指标。本实验目的是掌握硝态氮含量的测定原理及方法。

操作方法

植物体内硝态氮含量的测定实验

原理

在强酸条件下NO3－与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在碱性条件下（pH＞12）呈黄色，在一定范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接用分光光度计测定。

步骤

一、材料仪器设备及试剂

1. 材料：小麦或水稻等植物的叶片；

2. 仪器设备：分光光度计；电子分析天平；10ml、20ml刻度试管；移液管；25ml容量瓶；小漏斗（ф5cm）；玻棒；洗耳球；电炉；铝锅；玻璃泡；13.7cm定量滤纸若干。

3. 试剂及配制

10μg·ml－1 NO3―-N标准母液配制：精确称取烘至恒重的KNO30.1444g，溶于蒸馏水中，定容至200ml（即为100μg·ml－1 NO3―-N溶液）。然后再吸取该溶液10ml，加蒸馏水稀释至100ml，即为10μg·ml－1 的NO3―-N标准液。

5％水杨酸-硫酸溶液配制：称取5g水杨酸先加少量浓硫酸（密度为1.84）溶解后，再加浓硫酸定容至100ml，摇匀，贮于棕色瓶中，置冰箱保存一周有效。

8％氢氧化钠溶液配制：称取20g氢氧化钠溶于250ml蒸馏水中。

二、实验步骤

1.  NO3―-N标准曲线的制作

（1） 取6支10ml刻度试管，编号，按下表配制每管含量为0～10μg的NO3―-N标准液。加入表中试剂后，摇匀。在室温下放置20min后，每管再加入8.6ml 8﹪NaOH溶液，摇匀，使使显色液总体积为10ml。然后以0号管为空白对照，在410nm波长处测定吸光度（A）值。

（2） 标准曲线绘制

以1～5号管的NO3―-N含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品中硝酸盐的测定

（1）样品液的制备

取一定量的植物叶片剪碎混匀，称取2～3g（三份），分别放入三支20ml刻度试管中，加入10ml蒸馏水，用玻璃泡封口，置于沸水浴中提取30min。到时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25ml容量瓶中，并用蒸馏水反复冲洗残渣，最后定容至刻度。

（2）样品液的测定

取三支10ml刻度试管，分别加入样品液0.1ml，蒸馏水0.9ml, 5％水杨酸-硫酸溶液0.4ml，混匀后置室温下20min，再慢慢加入8.6ml 8％NaOH溶液，摇匀，使显色总体积为10ml，待冷却至室温后，以标准曲线0号管作空白对照 ，在410m波长处测定吸光度（A）值。

三、结果计算

根据样品液所测得的吸光度（A）值，从标准曲线上查出NO3―-N的含量，按下式计算样品中NO3―－N含量。

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