本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

操作方法

Caspase激活的比色计定量

材料与仪器

细胞
PBS Eppendorf DMSO
微量滴定板

步骤

1. 250 g 离心 5 分钟收集 2X10⁶~5X10⁶ 细胞，用 pH 7.2 的冷 PBS 洗 1 次，用 200 μl 溶解缓冲液重悬。

2. 在冰上孵育细胞 30 分钟。

3. 用 Eppendorf 将样品在 13000 r/min 离心 5 分钟，取上样进行 Caspase 活性测定：每种样品留一等份作蛋白质定量。

4. 在水或 DMSO 中溶解底物，配置成 20 mmol/L 的储存液，可在 -20℃ 避光保存。

5. 将反应混合液置微量滴定板中，用带动力学装置的 SpectraMax 微量滴定板分析仪在 405 nm 滤光片下读取反应数据。每 2~20 秒检测样品，确定底物的初始水解率；保证所得底物水解率为线性。

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