分级分离(Fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清液中的颗粒沉淀下来，从而使各种细胞结构，如细胞核、线粒体等得以分离。

操作方法

高速离心法

材料与仪器

线粒体
离心机

步骤

1.  将装有上清液的高速离心管，从装有冰块的烧杯中取出，配平后，以17 000 rpm 离心20分钟，弃上清，留取沉淀物。
2.  加入0.25 mol/L 蔗糖-0．003 mol/L 氯化钙液1 ml，用吸管吹打成悬液，以17 000 rpm 离心20分钟。

3.  将上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入0.1 ml 0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化钙溶液混匀成悬液（可用牙签）。
4.  取上清液和沉淀物悬液，分别滴一滴于干净载玻片上（分别标记①、②涂片），各滴一滴0.02%詹纳斯绿B染液盖上盖片染20分钟。

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