本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

操作方法

用制备性的自由流动电泳对高尔基体进行亚分部

材料与仪器

高尔基体
Chamber 缓冲液

步骤

1. 从 1.2 mol/L 蔗糖/匀浆液界面处分离富含高尔基体的部分至终体积为 5 ml 左右 。

2. 分别加入 3 mg 的粗制曲霉 X-A型 α-淀粉酶和来自大麦芽的 3-A型 α-淀粉酶。

3. 将混合物在 4℃ 保温 45 分钟。

4. 保温结束后用尖端内径约 1 mm 的巴斯德吸管将悬液反复吹吸 40 次完成解除堆积的过程 。

5. 准备电泳介质（Chamber 缓冲液）

Chamber 缓冲液：

10 mmol/L 二乙醇胺

10 mmol/L 冰酸酸

5 mmol/L 葡萄糖

0.25 mmol/L 蔗糖

0.5 mmoI/L MgCl₂

6. 电泳中采用如下条件（除非厂家另有推荐）：167 mA ( 恒流），131±10% V/cm，缓冲液流速为 2.75 ml 每分部每小时，样品注入速度为 3.5 ml/小时，温度为 6℃，采用连续自由流动电泳装置（如 VAP 21，Weber GmbH, Munich, Germany )。

7. 离心收集得到的分部，例如在微量离心机中离心 2 分钟，然后重悬并用于分析。

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