阿须贝氏（Ashby）无氮培养基是一种缺乏结合态无机或有机氮源的培养基，可使自生固氮菌在保证碳源和无机营养供应的情况下，利用空气中的游离氮合成自身需要的含氮有机物，而其他各类微生物多无自生固氮能力，从而达到富集分离的效果。

操作方法

选择性培养法

原理

选择性培养是一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养，具有使混合菌中的劣势发展成优势菌的功能，故被广泛用于菌种筛选等领域。阿须贝氏（Ashby）无氮培养基是一种缺之结合态无机或有机氮源的培养基，可有效从土壤中分离自生固氮菌。阿须贝氏（Ashby）无氮培养基选择的原理是自生固氮菌在保证碳源（甘露醇或葡萄糖）和无机营养供应的情况下，可利用空气中的游离氮合成自身需要的含氮有机物，而其他各类微生物多无自生固氮能力，因此达到了选择性富集的效果。

材料与仪器

阿须贝氏无氮培养基 土
水 甘露醇 KH2PO4 NaCl CaSO4•2H2O CaCO3 蒸馏水 琼脂粉
培养皿 吸管 研钵 接种环 三角瓶 载玻片

步骤

一、 采集土样

用小铲铲取稍干的10 cm深和20 cm深的土壤样品约1克，适当研碎；
 二、 准备平板

将阿须贝氏培养基加热融化，待冷至50 ℃左右倒数个平板，冷却待用；
 三、纸板布土

将土样倒在约15 cm×15 cm 大小的毛面硬纸板上，摇动几下，轻轻倒去颗粒较大的土样；
 四、弹土接种

把纸板沾土的面朝向平板并盖上,随即用手轻轻弹数下.然后移去纸盖上皿盖；
 五、保温培养

将培养皿平板倒置后放入28 ℃恒温中培养4-7 d；
 六、观察菌落

凡出现大型、黏稠、半透明，颜色呈白色、褐色或黑褐色的菌落，一般都是好氧性固氮菌。
 七、分离纯种

可用平板划线分离法进行菌种纯化。

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