酵母菌四分体分析需要一台标准光学显微镜，显微镜载物台应可以沿x与y轴方向移动，并且可以精确地测量移动的距离，但不需上下移动。

操作方法

基本方案

材料与仪器

酵母菌
酵母裂解酶 山梨糖
解剖显微镜 解剖针

步骤

1a.  Glusulase酶处理：用无菌水洗涤孢子3次，再用5 ml 无菌水重悬并取30 μl 稀释在270 μl 无菌水中。在光学显徽镜下观察细胞，检测完整的子囊，加3 μl 稀释的Glusulase酶到孢子制备液中，用旋涡混合器轻轻振荡混匀，室温温育2 min，然后在显微镜下观察细胞，继续于室温温育，直到Glusulase酶处理完全。   1b.  酵母裝解酶-100T处理：细胞用50 μl 酵母裂解酶-100T溶液重悬。在光学显微镜 下观察完整的子囊。30℃温育10 min，沿试管壁缓缓地加入0.8 ml 无菌水。   2.  将消化管置于冰浴中，用接种环蘸取处理过的孢子在YPD剖分平板表面划两条平行线。

3.  在解剖显微镜下观察倒置平板，可观察到单个四分体，排列成四面体或钻石形的成簇孢子。   4.  固定平板，使平板上的划线与平台的x轴平行，选择一个独立的四分体，聚焦并定位在视野中心。使用粗调旋钮向上调整解剖针的位置，当操纵杆推至约一半时，针头接触到平板的表面。

5.  轻轻将针头接触到平板表面，紧挨并挑起四分体。   6.  移动平板，将针定位在离划线处1 cm 的位置并垂直于四分体孢子的划线，轻轻地将针头接触到琼脂的表面并置四分体于平板上，在操作过程中可能发生以下情况：

（1）没有放下孢子，出现这种请况需要重复步骤6，当针头接触琼脂时，用力稍大一点。   （2）平板上只有1个孢子，沿x轴移动约0.5 cm 重复步骤6。
（3）如果有2或3个孢子在平板上，那么沿y轴移动约1 cm，重复步骤6，放置1个或更多个孢子。旋动操纵杆将孢子分开，以便针尖冲击平板并带出孢子，挑出并重新安置孢子，以使孢子的位置与原划线垂直并各自相隔0.5 cm。

（4）如果出现4个孢子，应用针尖将它们分开。一旦完成以上工作，挑一个或更多的孢子，将它们点在原划线垂直的位置并各自相隔0.5 cm。   7.  用x轴和y轴的控制旋钮将平板移回使解剖针可直接在经过处理孢子的划线的正下方，重复步骤5和6，将毎个四分体孢子按一定间隔点在同一条直线上，位于原四分体所在直线的1 cm 处，并与之平行。

8.  这些直线的位置可以这样决定：在可动平台上随意划一标记线，然后与跟平台后缘相平的一个固定的x轴标尺对齐。另一种方法则是用一张每隔0.5 cm 作上标记的纸条沿平台的前缘贴上，此时用平板固定器的右下角作为随意决定的对齐点。   9.  继续重复步骤5~8，直到沿x轴的所有位置均点满剖分四分体，将平板转动180^。， 从平皿另一侧对应的划线上剖分其他四分体。平板的每一侧可剖分13个四分体。

常见问题

图一、解剖显微镜

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