本实验旨在学会甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA 的方法。琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使RNase 变性而不使RNA 变性的, 故采用甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA。

操作方法

凝胶电泳法

原理

琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使RNase 变性而不使RNA 变性的, 故采用甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA。

材料与仪器

RNA
MOPS 乙酸钠 EDTA 蔗糖 EDTA 溴酚蓝 二甲苯青 甲醛
电泳槽 电泳仪

步骤

1.  制备凝胶: 琼脂糖浓度1 . 2% , 加入5×甲醛凝胶电泳缓冲液和甲醛, 使两者的终浓度分别为1×甲醛凝胶电泳缓冲液和2.2 mol/ L;

2.  取一定量的RNA 样品, 加入5 × 甲醛凝胶电泳缓冲液2 . 0 μl , 37%甲醛3 . 5 μl , 去离子甲酰胺10 . 0 μl , 稍微离心混匀后置65 ℃水浴15 min , 然后迅速置于冰浴中5 min; 加入2 . 0 μl 加样缓冲液, 稍微离心;

3.  上样前, 凝胶在1 × 甲醛凝胶电泳缓冲液预电泳5 min(电压5 V/ cm) ;

4 . 将样品加到凝胶样品孔, 以4 V/ cm 电压进行电泳; 每隔30 min 将阴阳电极液混匀, 然后继续电泳;

5.  电泳结束后, 将胶放入0 . 5 μg/ ml 的EB 溶液中, 染色30 min; 紫外观察。

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