在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。

操作方法

制备DNA

材料与仪器

动物组织
PBS 乙酸铵 乙醇 酚 氯仿 异戊醇 TE
离心机 摇床 研钵

步骤

1.  切下组织并立即剪成小块，置于液氮中冻结。   2.  将200 mg~1 g 的组织用预冷的研钵和研杵研碎，或用锤子将其捣为细粉末，每100 mg 组织用1. 2 ml 消化缓冲液悬浮。

3.  500 g 离心细胞5 min，弃上请。贴壁生长细胞先用胰酶消化。

4.  细胞用1~10 ml 冰冷的PBS重悬，500 g 离心5 min，弃上清，重复1次。

5.  用1体积 的消化缓冲液重悬细胞。   6.  将样品在盖紧的管中于50℃摇荡下温育12~18 h。   7.  用等体积的酚/氯仿/异戊酵抽提样品，1 700 g 离心10 min。

8.  如果样品溶解得不好， 再加1体积不含蛋白酹K的消化缓沖液，并重复离心。

9  如果在界面上有一层厚的白色物质，重复有机抽提，将上层（水溶液）转移至一个新管中。   10.  加入1/2体积7.5 ml 乙酸铵和2体积100%乙醉，1 700 g 离心2 min。   11.  用70%乙酵洗涤，晾干，沉淀用TE。

12.  缓冲液重新溶解，使终浓度在约1 mg/ml 左右。

注意事项

1.  如果是用肝组织，要除去胆囊，因其含有高水平的各种消化酶。

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