重组人α2a/α2b干扰素生产流程中不可缺少的一环是产品的质量监控，通常采用的是HEp-2/VSV或Wish/VSV系统检测干扰素的生物活性。此系统常由于VSV或细胞的影响而不够稳定，且检测周期较长。（来源：医学基础免疫学实验指导，主编金伯泉李恩善，第1 版，北京：世界图书出版社，1990）

操作方法

夹心法ELISA

原理

选用2种针对rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b分子不同表位的McAb，1种McAb作为包被抗体，另1种McAb标记辣根过氧化物酶（HRP）作为结合物，催化底物显色。根据标准品OD值绘制标准曲线，在标准曲线上查出待检标本的含量。

材料与仪器

包被抗体 酶标抗体 标准品 ABTS底物
缓冲液 洗涤液 稀释液 终止液
ELISA板

步骤

1.  向ELISA板中加入稀释好的包被抗体100 μl/孔，4 ℃  24～48 h
2.  洗3次，加入10倍连续稀释的待测标本（做4个稀释度即可）或倍比稀释的标准品（6个稀释度）100 μl/孔，37 ℃，1 h
3.  洗3次，加入稀释好的酶标抗体100 μl/孔，37 ℃，45 min
4.  洗4次，加入配好的ABTS底物液100 μl/孔，RT，30 min
5.  测410 nm OD 6.  绘标准曲线

注意事项

1.  待检标本必须无污染，无溶血。

2.  标本稀释后加入ELISA板时，注意从低浓度向高浓度依次加入。

3.  结合物稀释液和底物缓冲液中禁止加入叠氮钠。

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