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操作方法

免疫荧光补体法实验

原理

用特异性抗体和补体的混合液与标本上的抗原反应，补体就结合在抗原-抗体复合物上，再用抗补体的荧光抗体与补体结合，从而形成抗原抗体补体复合物-抗补体荧光抗体复合物，在荧光显微镜下呈现阳性荧光的部位就是免疫复合物存在处，此法常用于肾穿刺组织活检诊断等。

材料与仪器

抗补体荧光抗体
PBS 甘油

步骤

1. 标本处理与直接法相同→将适当稀释的抗体及补体等量混合滴于切片上，将标本放入湿盒中37℃作用30min→用PBS洗2次，每次5min，搅拌或振动，吹干→滴加适当稀释的抗补体荧光抗体，在37℃中染色30min→用PBS洗2次，每次5min，振动，蒸馏水洗1min→甘油缓冲液封片，荧光显微镜下检查。

2. 对照染色

可作抗原对照、抗血清对照和灭活补体对照，将补体经56℃、30min灭活处理后，按补体同样稀释倍数与抗体等量混合，进行补体法染色结果阴性。

常见问题

免疫荧光法目前多用于临床检验：

1. 检测组织内免疫球蛋白或免疫复合物，如肾炎之肾穿刺标本、红斑狼疮之皮肤组织等；

2. 检查血液内自身抗体，此时常用小鼠的 组织标本作为抗原，滴加病人血清后，用带有荧光素的抗人免疫球蛋白抗体作间接免疫荧光法；

3.细胞表面抗原鉴定，适用于肿瘤细胞、淋巴细胞等，可在管内悬浮 状态标记染色后转移至玻片上观察，或用流式细胞仪（FCM）进行分类、定量计数；

4. 荧光示踪研究。

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