免疫荧光标记是微生物学、免疫学、病理学及免疫组织化学中常用的一种免疫学实验方法，在临床上得到了广泛的应用。

操作方法

单层生长细胞的免疫荧光标记实验

原理

免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。

材料与仪器

单层细胞
PBS 多聚甲醛 甲醇 抗体
离心机 水浴锅 培养箱

步骤

1.  置生长成片的单层细胞于冰上冷却，吸去培养液并以4℃PBS洗涤。吸去PBS。

2.  如欲研究细胞表面抗原，则以2%PFA于冰上面定30 min。如为细胞质抗原，则可用含0.1% Triton X-100的2%PFA于冰上固定30 min，或以100%甲醇在普通冰箱的结冻室（-10~-20℃）固定15 min。   3.  吸去固定液，用4℃PBS洗2次（毎次5 min）。稀释的笫一抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min。   4.  加第一抗体于培养皿中，使其恰好覆盖细胞，4℃温育1 h，然后用4℃PBS洗4次（每次5 min）。   5.  稀释的笫二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min。   6.  加第二抗体于细胞上，4℃温育4 h。然后用4℃PBS洗4次。   7.  若不想立即观察细胞，则将细胞于PBS中存放。盖好培养皿，以铝箔包裹，冷藏，在24 h 内观察此实验结果是很重要的，因荧光会迅速减弱或与细胞解离。

注意事项

1、荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长，可能会使荧光提前衰退。

2、每次试验均需设置以下三种对照：

（1） 阳性对照：阳性血清+荧光标记物；

（2） 阴性对照：阴性血清+荧光标记物；

（3） 荧光标记物对照：PBS+荧光标记物。

如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。

https://www.aladdin-e.com