免疫金标记技术（immunogold labelling technique）是以胶体金作为示踪物，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。胶体金是由氯金酸在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠和鞣酸等作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金。

操作方法

基本方案

原理

利用胶体金在碱性条件下带负电荷的性质，与蛋白质分子的正电荷基团籍静电吸引而形成牢固结合。除抗体外，胶体金还可与其它多种生物大分子，如SPA、PHA、ConA等结合。

材料与仪器

组织样品
免疫金标记物
培养箱 显微镜

步骤

1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒，由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片，放入玻片盒中（每边放6片），或故湿盒中（载玻片勿相互接触）。   2.  待载玻片达室湿且未干时，铺加PBS于切片上（勿溢出玻片）。   3.  稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min（每一载玻片上加40~50 μl 抗体，应能盖住切片）。   4.  用与泵相连的巴斯德吸管，在切片的一端吸去玻片上的PBS，并从另一端加上抗体，盖上加湿盒，室温温育1 h。
5.  以PBS冼玻片3次（5 min/次），从切片一端加入新的PBS缓冲液，由另一端吸去旧的缓冲液。   6.  稀释的第二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min（每载玻片可加40~50 μl 抗体）。   7.  加免疫金标记第二抗体温育2 h。   8.  显微镜下观察结果或放密闭玻片盒中，室温贮放。

9.  显微镜下观察结果，或置玻片盒中贮于4℃。

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