免疫组织化学染色法是指在抗体上结合萤光或可呈色的化学物质，利用免疫学原理中抗原和抗体间专一性的结合反应，检测细胞或组织中是否有目标抗原的存在，此方式不只可以用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现的位置。只要是能够让抗体结合的物质，也就是具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、病原体等都可侦测。

操作方法

免疫组织化染色

材料与仪器

新鲜组织
二甲苯 酒精 H2O2 抗原修复液 枸橼酸钠缓冲液 石蜡 福尔马林 PBS DAB 苏木素 树胶 丙酮 打孔液 柠檬酸钠 APES
恒温摇床 高压锅 塑料切片架 耐温玻璃容器 -80℃冰箱 恒冷冰冻切片机 载玻片

步骤

一．石蜡切片免疫组化染色实验步骤： 1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置60℃ 1 小时）。 （1）二甲苯I、II,各10 分钟。 （2）梯度酒精：100%，2 分钟® 95%，2 分钟® 80%，2 分钟® 70%2 分钟。 （3）蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床）。 2．过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3%H2O2，室温10 分钟（避光）。 3．蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床）。 4．抗原修复： 根据待检测的抗原，选择适当的方法。 附：抗原修复液（10mM pH 6.0 枸橼酸钠缓冲液）的配制 （1）储备液的配制： A 液：枸橼酸三钠-2H2O 29.41g + 蒸馏水1000ml B 液：枸橼酸21g + 蒸馏水1000ml （2）工作液的配制：A 液82ml + B 液18ml + 蒸馏水900ml 抗原修复的方法： （1）高压锅处理技术：枸橼酸钠缓冲液（10mM，PH6.0）,淹没切片,盖上锅盖，高压锅内煮沸,上汽3 分钟后缓慢冷却（可用自来水在高压锅外冲，以助冷却）。 （2）微波处理技术:用塑料切片架,置于塑料或耐温玻璃容器内，枸橼酸钠缓冲液淹没切片，选择中高或高档,5 分钟;取出并补充已预热的枸橼酸钠缓冲液；再选择中高或高档,5 分钟（. 最佳温度为92～95℃） （3）酶消化处理：此略。 抗原修复的注意事项： （1）组织不能干。 （2）选择抗原修复方法要因抗体而异。 （3）该方法主要用于10%福尔马林固定、石蜡包埋组织。 （4）抗原修复后至DAB 显色的过程中，均需用PBS 缓冲液。 5．PBS：5 分钟，2 次（置于摇床）。 6．正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分（保持组织呈湿润状态）,滴加正常山羊或兔血清（与第二抗体同源动物血清）处理，37℃，15 分钟。

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