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免疫荧光常见问题分析

· · 发布于 2024年10月24日 · 更新于 2024年10月24日 ·

问题	原因	建议
背景过高	一抗质量不高	使用特异性高、效价高的一抗
背景过高	一抗/二抗浓度太高	降低一抗/二抗浓度
背景过高	封闭不完全	增加蛋白封闭时间
背景过高	洗涤不充分	增加冲洗次数与时间
背景过高	可通过调节荧光显微镜的参数来减低背景
信号弱或无信号	无目的蛋白或表达量极少	选用表达量高的细胞或组织
信号弱或无信号	细胞通透性差	增加通透剂的作用时间或浓度
信号弱或无信号	一抗/二抗浓度太低	增大其浓度
信号弱或无信号	二抗选择错误（种属不匹配）	选用与一抗种属相匹配的二抗
荧光猝灭快	荧光素本身特性决定，光稳定性差	选用光稳定性好的荧光素二抗
荧光猝灭快	用普通的封片剂封片	选用防荧光猝灭剂封片
细胞有自发荧光	使用了戊二醛固定	在固定后荧光染色前进行荧光淬灭，如使用NaIO4，NaBH4，甘氨酸等，染色前检查自发荧光
细胞有自发荧光	材料本身（如石蜡）有自发荧光	设立阴性对照，通过降低荧光显微镜的参数来消除背景染色
细胞有自发荧光	细胞成分中能够产生自发荧光的分子（例如核黄素、细胞色素等）的含量高；培养细胞中死细胞／活细胞比例高

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探索主题：免疫荧光

Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

阿拉丁科学.《免疫荧光常见问题分析》. 阿拉丁知识库，更新于 2024年10月24日。
                            https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/immunohistochemistry-faq-analysis.html

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