巨噬细胞是体内重要的天然免疫细胞，体外检测其功能并不能完全反映其体内行为，而检测某些药物的实际效应，又往往需要体内测定巨噬细胞活性。以细菌内毒素 LPS 活化巨噬细胞为例，LPS 是一种脂类和多糖的复合物，是革兰阴性菌细胞壁的主要成分，是内毒素和重要群特异性抗原。LPS 通过诱导单核-吞噬细胞系统的活化，大量释放 TNFα、IL-6 等多种促炎症细胞因子导致脓毒症、脓毒症休克，甚至死亡的发生。TLR4 是单核-吞噬细胞系统识别 LPS 的主要模式识别受体。

原理

体内活化巨噬细胞的基本原理是 LPS 是一种脂类和多糖的复合物，是革兰阴性菌细胞壁的主要成分，是内毒素和重要群特异性抗原。LPS 通过诱导单核-吞噬细胞系统的活化，大量释放 TNFα、IL-6 等多种促炎症细胞因子导致脓毒症、脓毒症休克，甚至死亡的发生。TLR4 是单核-吞噬细胞系统识别 LPS 的主要模式识别受体。

操作方法

体内活化巨噬细胞

原理

体内活化巨噬细胞的基本原理是 LPS 是一种脂类和多糖的复合物，是革兰阴性菌细胞壁的主要成分，是内毒素和重要群特异性抗原。LPS 通过诱导单核-吞噬细胞系统的活化，大量释放 TNFα、IL-6 等多种促炎症细胞因子导致脓毒症、脓毒症休克，甚至死亡的发生。TLR4 是单核-吞噬细胞系统识别 LPS 的主要模式识别受体。

材料与仪器

动物：
6～8 周龄昆明小鼠
试剂：
生理盐水，2 μg LPS（溶于 1 ml N
a
C
l
）
仪器：
注射器

步骤

体内活化巨噬细胞的基本过程可分为以下几步：
（1）将小鼠随机分为 2 组，分别给小鼠腹腔注射 1 ml 生理盐水和 1 ml LPS 溶液，12 小时后，小鼠脱颈椎处死，分别回收腹腔巨噬细胞和腹腔液。
（2）Griess 法检测腹腔液 NO 水平；ELISA 法测定腹腔液 TNF-α。
（3）采用贴壁法培养腹腔巨噬细胞，同时在培养液中加入荧光微球，37 ℃ 培养 1～2 小时，利用流式细胞术观察巨噬细胞吞噬能力。
（4）可以同时分析 IL-12、IL-10、iNOS 及 Arg-1 等鉴定其活化类型，每个实验至少重复 3 次。

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