Il-8是一种分子量为8～10kD的多肽，对嗜中性粒细胞，T淋巴细胞、嗜硷性粒细胞具有趋化作用，并可激活嗜中性粒细胞，是一种重要的炎症介质。在严重感染病人的血清中、炎症局部渗出液中都可检测到高水平的IL-8。（来源：医学基础免疫学实验指导，主编金伯泉李恩善，第1 版，北京：世界图书出版社，1990）

操作方法

夹心法ELISA

原理

采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体，其中一株（4D7）作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-8，另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。

材料与仪器

抗体 标准品 ABTS
缓冲液 PBS
ELISA板

步骤

1.  包被

pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml，加入96孔板，100 μl/孔，放4 ℃，36 小时。
2.  封闭

0.1 ％吐温PBS（Buffer A）冲洗96孔板三次，加3 ％BSA Buffer A（Buffer B）200 μl/孔，放37 ℃，1 小时。

3.  加待检样品

Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100 μl/孔，放37 ℃，3 小时。

4.  加酶标抗体

Buffer A冲洗96孔板五次，3 ％PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100 μl/孔，放37 ℃，1 小时。
5.  显色

Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物（ABTS)），0.2 mg/ml，加3 ％H₂O₂，2 μl/ml，加入96孔板，100 μ/孔，室温下或37 ℃显色。 　

注意事项

1.  待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快（6小时以内）分离血清。

2.  封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。

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