🌐 English Site
客服热线：400-620-6333
  • 联系我们
  • 技术支持
  • 订单查询
  • 登录
  • 注册
切换导航
购物车
搜索
现货产品当日发货
高级搜索
快速下单 SDS / CoA 结构搜索 大包装与定制
菜单
登录
྾
224,000+ 科研产品 · 三重ISO认证 · 每个产品均提供COA和SDS · 现货产品当日发货
实验方案（Protocols）

从小鼠脾脏分离小鼠天然杀伤细胞

· · 发布于 · 更新于 ·
简介

作者：J.E.科利跟等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

操作方法

从小鼠脾脏分离小鼠天然杀伤细胞

步骤

基本方案 由于所用M A b 只能检测C 57B L 背景小鼠体内的N K 1. 1+C D 3- N K 细胞，故本方 案适用于C 57B L / 6 或 者 C 57B L /10 (以 及 H 2b、 d、q同系小鼠）小鼠脾脏细胞。 清除杂细胞所用的单克隆抗体的活性对本方案至关重要。单克隆抗体可以买到，并 且其杂交瘤可以从A T C C 得 到 ，因此建议检测单克隆抗体的活性以保证实验成功。最 佳补体和细胞浓度也需要通过实验确定。 材 料 （带V 项 目 见 附 录 1) C 57B L /6 或者 C 57B L /10 小鼠 V T r i ^ N H 4C l 裂解缓冲液 V H B S S / 3 % (W V ) FBS 10 X 单克隆抗体储存液
G K 1.5 ( A T C C 号 TIB207 )、 53-6.72 ( TIB105)、 M 5/114. 15.2 ( TIB120)、 Jlld 2 (TIB183; PharMingen; 单克隆抗体配方见附录1) 单克隆抗体M A R 18. 5 (TIB216; PharMingen) 浓 度 lmg/ml (单克隆抗体配方见 附 录 1) V 含酚红的 H B S S (Life Technologies) /10% (V /V ) FBS V 低 Tox-M 兔补体，无菌复溶 淋巴细胞M 密度梯度分离液（Accurate Chemical and Sciendfic)，室温 V R P M I - I O 完全培养基 F F T C 标记的抗C D 3 抗 体 和 P E 标记的P K 136抗 体 （Pharmingen) 50m l 和 15m l 带盖聚丙烯锥底离心管 Beckman C S -6R 离 心 机 （或同类离心机） 血清学吸管 注 ：如果细胞用于继续培养，所有试剂和材料必须保证无菌。 1 . 处死小鼠，无菌取脾脏。 2 . 制 备 脾 脏 细 胞 悬 液 （单 元 2.1)，置 于 50m l 离心管中，避免将纤维性杂质移入离心 管 。 200g 离 心 5m i n 以 洗 涤 细 胞 。采 用 单 元 2 . 1 的 方 法 裂 解 红 细 胞 ，或使用 T W N H 4C l 裂解缓冲液。每个脾脏的细胞用Iml H B S S / 3 % F B S 混悬。 3 . 用台盼蓝拒染法计数活细胞（附 录 3C )。用 H B S S / 3 % F B S 混 悬细胞至5 X 107 个细 胞/ml。置于冰上保存。 4 . 制备下述单克隆抗体的I O X 混 合 溶 液 （10X 每种抗体的饱和浓度）： G K 1.5 (抗 C D 4) 35-6.72 (抗 C D 8) M 5/114. 15. 2 (抗 I-A 和 I-E d’k) Jlld.2 (抗 C D 24) 5 . 每 0.9m l 细胞悬液加入0.1m l 单克隆抗体混合液， 4°C孵 育 30min。 6 . 用 冰 的 H B S S / 3 % F B S 洗 细 胞 2 遍 ， 4°C ， 200g 离 心 5min，弃上清。用 IOml冰的 H B S S / 3 % F B S 混悬细胞再洗一遍。将 细 胞 用 H B S S / 1 0 % F B S 混悬至浓度为5 X 107 个细胞/m l 。 7 . 加 入 10Mg/m l 抗 大 鼠 ic (M A R 18.5; lmg/m l 储存液）和 低 Tox-M 兔补体至细胞悬 液 使 其 达 到 最 佳 终 浓 度 （通 常 1 : 6 , 但需要根据经验确定）。 37°C 孵 育 45min，每 15m i n 振摇一次。 8•用 H B S S /10% F B S 洗 一 遍 （步骤 6)。 9 . 用 5m l H B S S / 1 0 % F B S 混悬细胞。取少量细胞悬液采用台盼蓝拒染法计数活细胞 (附录3 0 , 以确定补体裂解效果。 10. 将 5m l 室温的淋巴细胞M 密度梯度分离液加入到一个15m l 离心管中。将 5m l 细胞 悬液轻轻加在分离液上。室温， 200g 离 心 20min，使离心速度缓慢下降。 11. 用吸管从界面小心吸取液体，放 入 另 一 个 15m l 离心管中。必要时可将界面放在白 色背景前以便看清。用 R P M I -I O 完全培养基洗2 遍 （方法同 步 骤 6)。台盼蓝染色 计数活细胞，备用。

12.为 检 验 细 胞 纯 度 ，可 加 入 终 浓 度 为 lOug/ml 的 抗 C D 3- F I T C 和 P K 136-PE (抗N K 1. 1 ) 抗体，进 行 流 式 分 析（第四章）。

​


如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。

https://www.aladdin-e.com

目录： 实验方案（Protocols）
探索主题： 免疫学实验

Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《从小鼠脾脏分离小鼠天然杀伤细胞》. 阿拉丁知识库，更新于 2024年12月23日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/isolation-of-mouse-natural-killer-cells.html
这篇文章对您有帮助吗？ Yes No 有 0 人觉得有帮助
隐私政策 使用条款 Cookie政策 销售条款 销售政策
产品仅提供给经过验证的企业、机构和合格的专业人员用于研发。不适用于人类、动物、诊断或治疗。
Copyright © 2023至今 上海阿拉丁生化科技股份有限公司 保留所有权利。