什么是ITS+（100×）及其使用意义

Insulin-Transferrin-Selenium-Linoleic Acid（ITS+，100×）是一种化学成分明确的补充剂，旨在替代或减少哺乳动物细胞培养中对动物血清的依赖。每种成分均发挥独特的生理作用：胰岛素促进葡萄糖摄取和合成代谢；转铁蛋白作为铁转运蛋白，同时具有减轻氧化应激的作用；亚硒酸钠是支持抗氧化酶活性（如谷胱甘肽过氧化物酶）的必需微量元素；亚油酸是维持膜完整性和促进细胞增殖的必需脂肪酸。

亚油酸的加入使ITS+有别于基础ITS配方，尤其适用于对脂质需求较高的细胞类型，如肝细胞、软骨细胞、脂肪细胞及某些干细胞系。使用ITS+可使研究人员实现更具重复性的、成分明确的培养条件，这对于生物生产、干细胞分化、毒理学检测及符合法规要求的工作流程至关重要。

操作规程：ITS+（100×）的配制与使用

所需材料：ITS+（100×）储备液（货号：I1527936）、无血清或低血清基础培养基（如DMEM、RPMI-1640或DMEM/F-12）、0.22 µm无菌过滤装置（如需从头配制完全培养基）及标准无菌操作设备。

分步操作规程：

1. 谨慎融化：在2–8 °C过夜或室温下解冻100× ITS+储备液。轻柔颠倒混匀，勿涡旋振荡。
2. 配制工作培养基：按1:100（v/v）比例将ITS+（100×）储备液加入基础培养基，配制1×工作浓度。例如，将5 mL ITS+（100×）加入495 mL基础培养基中。
3. 混合与过滤：轻柔摇动补充后的培养基。如配制大批量或添加其他组分，需通过0.22 µm膜进行无菌过滤。
4. 质量检查：配制好的培养基应澄清透明，无颗粒物。如出现浑浊或变色，应弃用。
5. 细胞培养应用：按既定细胞培养操作程序，将补充好的培养基替代含血清培养基使用。使用前预热至37 °C。

注意：ITS+的最佳使用浓度因细胞类型而异。某些特定分化条件下的方案采用0.5×或2× ITS+。建立新方案时，建议进行浓度摸索实验。

推荐应用及适用细胞类型

ITS+（100×）广泛适用于需要成分明确无血清条件的哺乳动物细胞培养场景：

• 干细胞培养与分化：ITS+被广泛纳入多能干细胞（iPSC和ESC）定向分化方案，包括向肝细胞样细胞、软骨细胞和神经系细胞分化。
• 原代细胞培养：肝细胞、软骨细胞和平滑肌细胞可从亚油酸提供的脂质支持中获益，使ITS+在这些体系中优于标准ITS。
• 生物生产与CHO细胞培养：ITS+可作为需要无血清或无动物成分（ACF）培养基的重组蛋白和单克隆抗体生产工作流程中的血清替代品。
• 类器官及三维培养体系：ITS+常被纳入类器官培养基配方，在不使用成分不明的血清的情况下支持细胞活力和生长。
• 毒理学及ADME研究：以ITS+补充的成分明确培养基可减少不同批次血清引入的变异，提高检测重复性。

从含血清培养条件转换为无血清条件时，应始终通过适当阳性对照和细胞活力检测方法（如台盼蓝排除法、MTT法或活/死细胞染色法）对ITS+的性能进行验证。

操作、储存与质量保证

储存条件：ITS+（100×）应在-20 °C下以原始容器储存。正确储存条件下，产品在标签注明的有效期内保持稳定。强烈建议在首次解冻时将储备液分装为单次用量，以避免反复冻融导致性能下降。

解冻方法：在2–8 °C或室温下解冻。勿使用高于37 °C的水浴，以免高温降解硒化合物或使转铁蛋白变性。

操作注意事项：全程保持无菌操作。加入完全培养基后，将补充后的培养基储存于2–8 °C，并在该基础培养基配方推荐的时间范围内使用（通常为2–4周）。

质量控制：产品外观应为澄清至微黄色溶液。每批产品通常经过无菌性、内毒素水平及细胞培养性能（如促生长检测）测试。批次特定规格请参阅质量检测报告（CoA）。

法规说明：ITS+（100×）仅供科学研究使用（RUO），未经批准用于临床或诊断程序。