实验方案(Protocols)

白细胞移动抑制实验

简介

致敏的T淋巴细胞与相应的抗原反应,能引起代谢活化,并释放出多种有生物活性的物质。其中有抑制单核,巨噬细胞移动的因子(MIF)及抑制多型核白细胞移动的因子(LIF),正常淋巴细胞无此反应。

操作方法

白细胞移动抑制实验

原理

检查白细胞移动抑制因子的存在,是借其抑制白细胞移动的生物活性为指标的,依观察白细胞移动的方式不同,移动抑制试验有三种不同的方法,即毛细管法,琼脂糖打孔法及琼脂糖微滴法,这里介绍毛细管法。

材料与仪器

白细胞
细胞培养液 Hanks液 淋巴细胞提取液
毛细玻璃管 盖片 离心机 试管 滴管

步骤

1.   淋巴细胞提取。
2.   用无菌镊子夹毛细管,插入细胞悬液中,使细胞悬液借毛细管现象进入毛细管内,在离上端7~8mm时,将毛细管取出,装入各毛细管中,使细胞悬液高度力求相对等。
3.   将毛细管空端经火焰封固端朝下置试管中,于水平离心机内1000转/5,10分钟。

4.  取出毛细管可见细胞被压紧里4~6 mm 高的柱,表层发白主要是白细胞,下层发红为红、白细胞混合存在。用小砂轮在毛细管壁的细胞——液体界面处划痕,小心折断。

5.  将溢满细胞的毛细管蘸少许凡士林,置平底凹玻中固定,每凹放2~8只毛细管,而后滴加培养液,将毛细管分为两组,每组3~4支,一组为实验组,另一组为对照组。

6.  试验组用199培养加适量抗原作培养液,对照组只用199液作培养液,不加抗原。
7.   凹孔上加盖玻片封闭,勿留有气泡,将凹玻片置于铺有湿布纱布的铝盒中,置37℃温箱中培养18~22hr。
8.   取出凹玻片,用解剖显微镜测定各毛细管白细胞移动的扇面之长短直径。试验结果用移动指数MI表示:
 
  9.  正常值80~120%。80%以下皆为抑制,即移动抑制阳性。120%以下皆为刺激,刺激反应的产生可能是抗原浓度偏低。


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Da — 若无特别说明,分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《白细胞移动抑制实验》. 阿拉丁知识库,更新于 2024年12月23日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/leukocyte-movement-inhibition-assay.html
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