T4RNA 连接酶已经用来生成很多位点特异修饰的 RNA，尤其是寡核苷酸修饰和用反义密码 tRNA 修饰的 RNA。另外，T4RNA 连接酶还可用于 RNA/DNA 分子内/分子间连接、甲链寡脱氧核苷酸的连接、克隆全长 cDNA 及将非天然氨基酸掺入蛋白分子中。

操作方法

用T4RNA连接酶连接RNA分子

材料与仪器

T4RNA连接酶 供体RNA 受体RNA
10XT4RNA连接酶缓冲液 无核酸酶的水 FEG RNA酶抑制剂

步骤

一材料与设备

1)10XT4RNA 连接酶缓冲液：50 mmol/LTris (pH7,8)，l0 mmol/L MgCl₂，5 mmol/LDTT,1 mmol/L ATP

2) 无核酸酶的水

3)FEG(polyethyleneglycol)40%

4)RNA 酶抑制剂

5)T4RNA 连接酶

6) 供体（donor)RNA

7) 受体（acceptor)RNA

(二）操作方法

1) 进行 RNA 与 RNA 分子连接的反应体系如下：

供体 (donor)RNA                                              100-500ng

受体 (acceptor)RNA                                            250ng

10XT4RNA 连接酶缓冲液                                     4ul

RNasin 核酸酶抑制剂 (40U/ul)                             1ul

PEG,40%                                                             20ul

T4RNA 连接酶 (9-12U/u1)                                   1ul

补无核酸酶的水至终体积为                                 4u1

2)37℃ 孵育 30 min，或 16℃ 反应过夜.

3) 纯化回收，一 20℃ 保存。

注意事项

1) 供体（donor)RNA 分子如Poly(A)+RNA) 必须包含 5＇磷酸基团。

2)RNA 分子能有效的被多聚核苷酸激酶磷酸化。

如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。

https://www.aladdin-e.com