磁力转染实验
磁力转染实验
磁力转染的定义是，通过磁力介导，用磁性颗粒运送核酸或核酸载体。载体可以结合到磁性颗粒上，磁性颗粒通常是氧化铁纳米颗粒，大多数情况下通过非共价键进行连接。磁力可以克服液体动力（hydrodynamic force) , 使得磁性载体聚集和/或停留在耙组织区域。在细胞培养中，磁性载体可以在几分钟之内沉降到靶细胞。这样就克服了核酸运送中的扩散障碍，所有的载体都与靶细胞紧密接触，遗传物质进人细胞可以实现同步化。核酸运送速度大大加快，很多载体的感染效率提高。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」
操作方法
使用磁性纳米颗粒进行核酸运送 步骤 使 用 磁 性 纳 米 颗 粒 进 行 核 酸 运 送 材料 试剂 磷 酸 盐 缓 冲 液（P B S )， H E P E S 缓 冲 盐 溶 液（H B S ) ， 0 . 9 % 的 NaCl, 或用于载体制备的无血清细胞培养基。 转染试剂的选择 仪器 37°C 细胞孵箱 微量离心管 永久磁体 稀土永久磁体 (rare earth permanent magnet) 是最合适的磁体，例 如 ，钦铁硼磁体 (neodymiumiron boron magnet )。制造厂商包括 IBS M agnet(柏林，德 国）， Dexter Magetic Technologies 最实用的磁片是圆形的，直 径 〇.5 cm、 lcm 、 1.5 cm、 2 cm 或更大，厚 度 0.5 cm。长方体磁片的尺寸为 2 cm X lcm X 0. 5 cm。 注意：稀土永久磁体会产生永久的磁场，必须小心操作。这些磁体可以删除磁 存储设备，干扰电子或电子机械设备（如心脏起搏器） 的正常工作。 方法 1 . 用去离子水制备 lmg/m l 的磁性纳米颗粒。 多数厂商提供的磁性纳米颗粒以不同浓度（mg/ml) 的液体悬浮溶液形式提供。多聚阳离子和多聚阴离子包被的磁性颗粒在含盐溶液中会自发聚集。 2•计算需要的磁性纳米颗粒的量。对非病毒载体，按每微克核酸使用〇.2〜4 ug外 层包被的磁性颗粒进行运送；15 ug 聚 氮 丙 啶（polyethylenimine) 包被的磁性颗粒足以 结 合 I X l O 10的腺病毒颗粒。不同培养器皿推荐加入的核酸剂量、非病毒载体转染 参 见 表 1 ，病 毒 载 体 磁 力 转 染 见 表 2 。加入需要量的磁性颗粒到一个微量离心管中。 如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。
司）的操作手册。对聚阳离子或聚阴离子包被的磁性颗粒，如 CombiMAG, 不需要对载体进行亲和素偶联。病毒载体可以使用亲和素偶联，并且使用相应的链霉亲和素蛋白包被磁性颗粒。或者将载体与磁性颗粒共孵育即可 [最好使用阳离子包被磁性颗粒，但是阴离子包被颗粒可用于慢病毒（ H airnet al. 2005)]。
(芝 加 哥 ，伊 利 诺 伊 州）， Bisbell Magnetic product Ltd. (Burton-on-T rent, 英 国 ），或者 amfmagnetiC(Masc 〇 t , 澳大利亚）。设计和优化用于磁力转染的磁碟已经商业化生产, 可 以 从 OZ
Bioscience ( Marseille，法 国 ；www.ozbioscience.com ) 或 chemicell ( 柏 林 ，德 国 ；WWW.chemicell.com) 购 买 。
细胞培养器皿的选择参见表 1。
对每一种磁性颗粒和载体类型，磁性颗粒与基因载体的比例必须进行优化。具体的优化方法参见 www.ozbiosciences.com.
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