香豆精苷的鉴别
最早发现在豆科香豆 Coumarona odoruta 中,故称香豆素,具特异香气。香豆精类与糖结合而成的苷叫香豆精苷(coumarin glycosides)。香豆精以游离状态及其苷类存在于生物体内
用于检测、定量和定位抗原与抗体的技术——ELISA、免疫印迹、免疫组化与流式细胞术。以下是我们知识库中标注该主题的实验方案、常见问题与技术文章。
最早发现在豆科香豆 Coumarona odoruta 中,故称香豆素,具特异香气。香豆精类与糖结合而成的苷叫香豆精苷(coumarin glycosides)。香豆精以游离状态及其苷类存在于生物体内
纯化抗体通常用于直接检测抗原。此时抗体标记有一个易于鉴定的标记物,用于结合和检测所研究的抗原。在间接检测抗原方法中,一抗不被标记,而是用标记的二抗(一种抗免疫球
活细胞表面保留有较完整的抗原或受体,先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合,再用荧光标记的第二抗体结合,根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原
粗糙链孢霉(Neurospora crassa,2n=14),又称红色面包霉,在分类学上属于真菌中的子囊菌纲、球壳目、脉孢菌属,目前已知有4~5种。
酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae),又称面包酵母或者出芽酵母。酿酒酵母是与人类关系最广泛的一种酵母,不仅因为传统上它用于制作面包和馒头等食品及酿酒,在现代分子和
毕赤酵母转化方法最常用的是电转化法和原生质体法,其中电转化法最为方便,转化效率最高,最容易产生多拷贝整合。由于原生质体法必须首先制备去除细胞壁的原生质体细胞以利于
大肠杆菌染色体呈环状。高频重组菌株(Hfr)的染色体上整合有F因子,当Hfr细菌与F-细菌细胞发生接合(即杂交)时Hfr细胞(供体菌)的染色体从Hfr细胞向F-细胞内转移。
溶出度系指药物从片剂或胶囊剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。但在实际应用中溶出度仅指一定时间内药物溶出的程度,用于(1)测定药物片剂溶出的程度(2)对片剂
异种体外受精实验模型的建立可以用于:(1)将不同种动物的雌雄配子模拟体内条件混台培养使其融合受精;(2)通常采用金黄地鼠卵为雌配子与各种哺乳动物或人的精子进行实验
使用油脂介孔膜蛋白结晶可被用于解决X射线晶体结构的原核和真核细胞的蛋白质,蛋白质是单体,同源异多聚体,生色含和生色,和alpha螺旋和β-管蛋白。最近取得的成功观的结
通常转录发生在生物体内,如果我们将含有RNA转录酶、NTP等条件,在体外无细胞系统中,用DNA作为模板,模仿体内转录过程生成RNA,这样的技术则能够控制转录的基因、转录的过
直接点样法最早由Stanford大学Brown实验室发展而来,是将微量的寡聚核苷酸片段、cDNA或蛋白质等通过特定的高速点样机器人直接排列到玻片等介质上,生物大分子探针通过共价
胶体溶液型液体药剂按分散系统分类,包括两类:一类属于分子(或离子)分散体系的高分子溶液。如羧甲基纤维素钠、西黄蓍胶、阿拉伯胶、琼脂、白芨胶等胶浆剂,以及胃蛋白酶
胚胎移植技术是克隆、转基因、体外受精和性别鉴定等各项胚胎生物技术研究和发展必要的技术手段和环节,也是目前比较流行的动物繁殖技术之一。
酵母分为天然酵母和人工培养酵母两种。天然酵母即野生酵母,常附着在果皮上。果汁在酵母菌作用下将中的葡萄糖发酵生成酒精并且产生二氧化碳。当前发酵结束后,对果酒进行过
目前基因导入技术是制备ips细胞的主要技术,基因载体的改良推动无遗传修饰ips细胞的建立。载体主要有整合型载体、非整合型载体以及新型载体。新型载体中非病毒微环状载体能
杂交瘤克隆化主要用于(1)将抗体阳性孔进行克隆化。(2)将抗体分泌细胞、抗体非分泌细胞、所需要的抗体(特异性抗体)分泌细胞和其它无关抗体的分泌细胞分离开。
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。用于(1)灭菌(2)保证器材等不受污染。
膜剂系指药物与适宜的成膜材料经加工制成的膜状制剂,供口服或黏膜外用。膜剂的研究始于60年代,70年代开始国内外对膜剂的研究应用有较大的发展,目前我国正式投产的膜剂约
有血凝素(HA)的病毒能凝集人或动物红细胞,称为血凝现象,血凝现象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验,原理是相应抗体与病毒结合后,阻止病毒表面HA与红细胞结合,常用于
栓剂按其作用可分为两种。一种是在腔道内起局部作用;另一种是由腔道吸收至血液起全身作用。栓剂的制备和作用的发挥,均与基质有密切的关系。因此选用的基质必须符合各项质
胚胎冷冻对活组织和细胞进行冷冻保存时,冷冻过程将可能对细胞造成损伤。
总悬浮颗粒物(Total suspended particulate,简称TSP)是指悬浮在空气中,空气动力学当量直径≤100μm的颗粒物。它源自烟雾、尘埃、煤灰或冷凝气化物的固体或液态水珠,能
电导率(Electric conductivity)是以数字表示溶液传导电流的能力。纯水的电导率很小,当水中含有无机酸、碱、盐或有机带电胶体时,电导率就增加。电导率常用于间接推测水
浊度(Turbidity)是由于水中含有泥沙、粘土、有机物、无机物、浮游生物和微生物等悬浮物质所造成的,可使光散射或吸收,阻碍光线透过,属于感官性状的指标。天然水经过混凝
将水样或消解好的水样直接吸入火焰,火焰中形成的原子蒸汽对光源发射的特征电磁辐射产生吸收。将测得的样品吸光度和标准溶液的吸光度进行比较,确定样品中被测元素的含量。
二氧化硫是含硫化合物中典型的大气污染物,它来源于煤和石油等燃料的燃烧、含硫矿石的冶炼、硫酸等化工产品生产废气的排放等。据估计地球中1/3的二氧化硫是通过化石燃料燃
天然水的pH值(pH value)多在6~9范围内,这也是我国污水排放标准中的PH控制范围。pH值是水化学中常用的和最重要的检验范围之一。由于pH值受水温影响而变化,测定时应该在
清洁水在水层浅时应为无色,深层为浅蓝绿色。天然水中存在腐殖质、泥土、浮游生物、铁和锰等金属离子,均可使水体着色。水的色度(Clour)单位是度,即在每升水中含2mg六水
水中硝酸盐(Nitrate)是在有氧条件环境下,亚硝氮、氨氮等各种形态的含氮化合物中最稳定的氮化合物,也是含氮有机物经无机化作用最终的分解产物。亚硝酸盐可经氧化而生成
悬浮固体(Sespended solid,简称SS)是指悬浮在水中的固体物质,包括不溶于水的无机物、有机物及泥砂、黏土、微生物等。水中悬浮物含量是衡量水污染程度的指标之一。悬浮
高锰酸盐指数(Permanganate value),是指在酸性或碱性介质中,以高锰酸钾为氧化剂,处理水样时所消耗的量,以氧的mg/L来表示。水中的亚硝酸盐、亚铁盐、硫化物等还原性无机
从试管菌种开始,通过逐级扩大增加培养物,最终使用机械搅拌罐发酵枯草芽孢杆菌。摇瓶培养是实验室常用的通风培养方法,通过装有液体培养物的三角瓶放在摇床上振荡培养,以
生化需氧量(Biochemical oxygen demand,简称BOD)是指在有氧的条件下,水中微生物分解有机物的生物化学过程中所需溶解氧的质量浓度,以氧的mg/L 表示。水中有机物含量多,
本实验主要用于测定水中溶解氧。
红曲色素是红曲霉在生长代谢过程中产生的红色天然色素。红曲霉是目前世界上唯一生产食用色素的微生物。红曲色素可以通过固体和液体发酵两种方法培养红曲霉。红曲色素与其它
氨氮(NH3-N)以游离氨(NH3)或铵盐(NH4﹢)形式存在于水中,两者的组成比例取决于水的pH值和水温。当pH值偏高时,游离氨的比例高,反之,则铵盐的比例高。水温则相反。
土样经消化后溶液导入原子化器,形成的金属原子对特征电磁辐射产生吸收,将测得的样品吸光度和标准溶液的吸光度进行比较,即可得样品中元素的浓度。
化学需氧量(Chemical oxygen demand,简称COD),是指在强酸并加热条件下,用重铬酸钾作为氧化剂处理水样时所消耗氧化剂的量,以氧的mg/L来表示。化学需氧量反映了水体受
对于食品工业而言,受环境影响最大的因素就是水,同时食品加工又对水环境产生污染,要防止并控制水污染就必须了解其污染物种类与含量及理化特性等,就需要对水样进行分析检
本实验来源于山东大学医学院寄生虫学官方网站
水中氯离子的测定实验可以用于:检测水质,当水中氯化物高时,会损害金属管道和构筑物,并防碍植物生长。
空气中的氮氧化物(Nitric oxides)有NO、NO2、N2O、N2O3、N2O4、N2O5 等,其中以NO、NO2 形式为主。氮氧化物一般通过含氮的有机物燃烧时生成,主要来源于化石燃料高温燃烧、
当活性炭对水中杂质吸附时,会同时发生吸附和解吸现象,当吸附和解吸处于平衡状态时,称之为吸附平衡,这时活性炭和水之间的溶质浓度具有一定的分布比值,描述吸附容量qe
对于食品工业而言,受环境影响最大的因素就是水,同时食品加工又对水环境产生污染,要防止并控制水污染就必须了解其污染物种类与含量及理化特性等,就需要对水样进行分析检
本实验来源南方医科大学官方网站
铬的化合物常见的价态有三价和六价。在水体中,六价铬一般以CrO42-、Cr2O72-、H CrO4-三种阴离子形式存在,受水中pH、有机物、氧化还原物质、温度及硬度等条件影响,三
微生物的细胞小且透明,在普通光学显微镜下不易识别,必须对它们进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构。因此,微生物染色技
对于食品工业而言,受环境影响最大的因素就是水,同时食品加工又对水环境产生污染,要防止并控制水污染就必须了解其污染物种类与含量特性等,这一切都是需要对水样进行分析
肌肉的单收缩和强直收缩可以用于观察肌肉对刺激所产生的收缩反应现象。
将试样吸入空气-乙炔火焰中,使钙、镁原子化,并选用422.7 nm 共振线的吸收定量钙,用285.2 nm 共振线的吸收定量镁。
该实验方法来源于第四军医大官网
氟化物(F-)是人体必须的微量元素之一,缺氟易患龋齿病。水中氟化物的含量是衡量水质的重要指标之一,生活饮用水中含氟的适宜浓度为0.5~1.0 mg/L(F-)。当长期饮用含氟
该实验方法来源于第四军医大官网
甲醛是一种无色、具有刺激性且易溶于水的气体,能与蛋白质结合。吸入高浓度甲醛后,会出现呼吸道的严重刺激和水肿、眼刺痛、头痛,也可发生支气管哮喘。皮肤直接接触甲醛,
水中胶体颗粒微小或带电而稳定存在于水中难于沉降,可加入混凝剂于水中,破坏其稳定性后相互凝聚成大的絮凝体,同时搅拌有利于沉降。
总硬度(Total hardness)是指水中钙、镁离子的总浓度,并换算成氧化钙计算。硬度对工业用水关系很大,尤其是锅炉用水。各种工业对水的硬度都有一定的要求。饮用水中硬度过
该实验方法来源于第四军医大官网
水中总固体(Total solid,简称TS)又称蒸发总残留物,是在规定条件下,水样蒸发烘干至恒重时残留的物质,折算为每升水含残留物的毫克数计量。它是水中溶解性固体和悬浮性
清洁和擦拭仁作区,然后,将瓶子、吸管等放到工作区.接着,开始做准备工作配制培养基和其他试剂),准备工作完成后,进行培养工作.最后,整理工作台和用 70% 乙醇擦拭工作面.
如果对噬菌体颗粒进行纯化的目的,是为了获得随后亚克隆所需的外派 DNA 片段或制备噬菌体两臂,那么就可用离心来代替 CsCl 分级梯度和平衡梯度,通过离心将噬菌体颗粒沉淀
氟是人体必须的营养元素,又是有毒性的污染元素,自然界中的氟主要存在于荧石和磷灰石等天然矿物中。氟主要工业排放含氟气体、液体和废渣,以及磷肥的施用和含氟农药如氟化
我们可以通过运用体外细胞培养技术,在淡水软体动物门锥实螺属的培养细胞上,重新构建发动基本呼吸行为的 S 细胞网络. 这种体外重建的网络能够产生节律性运动形式并与整体
对于食品原料而言,土壤污染是影响原料产量、质量甚至食品安全性的重要因素,特别是食品中的重金属含量。本实验主要是让学生了解地区土壤污染状况和水污染与土壤污染的相关
食品中硝酸盐、亚硝酸盐含量是影响食品品质、危害人体健康的重要污染物质之一。其在食品原料中的含量主要受环境中氮含量的影响。本实验的目的主要是通过实验让学生了解不同
这种新一代的精子 F I S H 方法已经鉴定出了多种父系风险因子,比如年龄、多种药品、生活方式,以及环境方面和职业方面暴露的问题。这些精子 F I S H测定法提供了新的机会
在过去 20 年中,膜片钳技术已经成为现代电生理学的主要研究手段之一。初始仅被用来测量单通道电流,而目前它已经成为研究细胞兴奋性:离子通道的功能和药理作用以及不同代
清洁和和擦拭工作区,把试剂瓶、吸竹等放到工作台上(图6.5),先做准备工作. 如果必要.对使用的物品进行火焰消毒.保持工作面干净清洁.最后.整理好工作台上的物品.并川70%乙醉
氟是人体必须的营养元素,又是有毒性的污染元素,自然界中的氟主要存在于荧石和磷灰石等天然矿物中。氟主要工业排放含氟气体、液体和废渣,以及磷肥的施用和含氟农药如氟化
农产品中硝酸盐的测定实验可以用于:(1)检测食品中硝酸盐、亚硝酸盐含量;(2)作为食品品质、危害人体健康的测量标准之一。
胞外基质的制备实验可以用于:(1)研究胞外基质的组成成分以及生理特征;(2)观察其在不同组织中发挥的特定作用。
元基因组学(metagenomics) 可提供无倾向性的微生物环境样品的总的遗传结构和功能组成信息,而不需要对群落中的微生物进行培养。元基因组学目前充分利用了当前已知的多种全
存在于哺乳类动物中枢神经系统(CNS) 中的各种神经细胞是由增殖的多能干细胞或前体细胞在其发育过程中发生迁移、定位,分化而衍生的。然而,对于 CNS 中各种神经细胞的发育
实验动物的分组、标记和合理染毒,是取得良好实验结果和结论的前提,也是每一个毒理学试验首先做的工作。通过本实验学习试验动物的科学分组、标记和常用基本染毒方法。
培养皿培养板的操作对(1)细胞的生长(2)细胞的繁殖(3)细胞的接种等细胞实验都有需要。
研究外来化合物的毒性效应。常需测定动物接触外来化合物后,血液、尿液和组织中的化合物或其代谢产物的浓度,以及分析测定化合物所致的生物化学的变化。为此,采集和制备生
用光学方法记录单个成活神经元活动过程的技术,必须按照以下两个基本问题来加以考虑,即要记录什么和如何记录。特别在确定要记录什么时,应选择有意义的参数 (如膜电位或离
整体原位杂交是一个可以观察完整生物体内细胞基因表达(mRNA) 的过程。通过比较不同环境下生物体的基因表达区域的差别,有助于我们理解环境暴露对细胞和组织的特异性影响。
很多化学试剂和不同性质的离子辐射能导致染色体完整性的损伤,造成染色体在有丝分裂和减数分裂中的分布异常。配以多种与不同 D N A 序列互补的探针,荧光素原位杂交技术已
当今,在环境毒素和辐射暴露导致的人类和其他生物突变检测上需要更有效的方法。而环境基因组学研究是以非模式系统生物作为研究对象,这就需要一种不需要知道这些生物的基因
水样经过滤后,在一定温度下烘干,所得的固体残渣称为溶解性总固体,包括不挥发的可溶性盐类、有机物及能通过滤器的不溶解微粒等。烘干温度一般采用105℃,但105℃的烘干温
在体外建立一个精确的、可重复使用的神经元培养模型,对于神经科学的实验研究具有不言而喻的重要性。许多研究小组均已在神经元体外培养方面进行了很多探索,并形成了一些可
1、学习化学物急性毒性试验设计,掌握LD50 的测定方法。 2、观察辛硫磷的毒性反应。
在物理学上,任何电流都伴随产生磁场。在大脑和神经内部流动的离子流同样会产生磁场。超导量子干涉仪(superconducting quantum interference device,SQUID) 是最近 30 年
本章的目的首先是为那些希望使用该项技术的科学家们介绍这项切实可用的技术。其次也将对应用该项技术所获结果的典型范例进行更为详尽的讨论,如肌梭传入在运动觉中的作用(
本章主要阐述两个方面的内容:①在正常运动的动物上进行 EMG 和视频同步记录的方法;②将此方法推广至定量的生物力学方面的时机和所需的必要条件。关于这些方法在不同实验
光学记录涉及分子指示剂的使用,这些指示剂的光学特性(吸收特性或荧光特性) 会随细胞活动的参数而改变。可供使用的指示剂包括对膜电位(Vm) 敏感的、对钙浓度或对其他离子
本章所涉及的 EMG 精确解析技术可以复原 EMG 信号中的所有可利用信息。EMG 信号分析包括两类:形态分析和控制特性分析。形态分析是指 MUAP 波形参数的描述,如峰一峰幅度(
基因型可以通过多种实验方法进行检测,但是针对单倍型分析的检测方法,例如分子单倍型分析却很有限。依赖于标志之间连锁不平衡(linkag^ disequilibrium, L D )的程度,单
基于猫免疫缺陷病毒(F IV ) 的慢病毒载体对于介 导 整 合的转基因到非分裂的人体细胞是非常有用的。本章主要描述了生产和使用新一代F I V 载体的方法,讨论了 F IV和其他
H S V -I 的自然生理特点包括在神经元中建立一种终生潜伏状态,病毒基因始终是一种游离性分子。已构建了能产生完全不能复制的、无毒性的、能长期表达转基因的 H S V 载体,
基 因 枪 技 术 是 一 种 快 速 而 又 简 单 地 将 基 因 运 送 到 细 胞 内 的 技 术 。这 种 技 术 有 很 多 优 点 :可以直接输送质粒,不必像一些病毒载体系统那样构建
聚赖氨酸及其共聚物作为非病毒类基因载体获得了广泛的应用。尽管聚赖氨酸本身对细胞具有毒性,但通过共价键将聚乙二醇连接到聚赖氨酸链段后,细胞毒性大大降低 ,并且可以
针对病毒载体骨架编码的蛋白质的免疫反应可能发生,这就限制了体内表达转基因载体的应用。尽管如此, A d 仍然是最有效和最通用的基因传递系 统 。 这里我们讨论当前的用于
本章旨在为那些需要自己修饰抗体的研究人员提供实践指导。内容涵盖了保留 IgG抗体其抗原结合功能的常见化学和蛋白质水解修饰方法。过于剧烈的修饰方法则因导致广泛蛋白质变
基因打粑技术是建立在胚胎干细胞 (embryonic stem cell, E S 细胞) 和同源重组基础上的定点改变物种遗传信息的实验手段。首先在体外利用同源重组技术获得带有预先设计突
主 要 描 述 那 些 用 于 从 cDNA克 隆 中 恢 复 出 具 感 染 能 力 的 流 感 病 毒 的 方 法 。这 些 技 术 广 泛 地 应 用 于 外 源 基 因 的 整 合 和 表 达 、候 选 疫
S T A R 系 统 (6 个组氨酸标签和重新靶向)运用一个假受体和一个病毒的标签使全部再结合的病毒能被拯救和扩增,这些病毒已不能结合到天然的麻疹病毒的受体上。本操作规程
大多数造血细胞 ,包括造血干细胞和终末分化细胞,如初生 T 细胞和巨噬细胞,是不分化或自我更 新缓慢的。对于这些细胞,大多数非病毒或反转录病毒转染方法是不可行的。慢
正电子发射断层成像(PET) 是一种在体功能性神经影像技术,可以提供多种生理学参数的三维定量图像,如血流、葡萄糖代谢率、蛋白质合成、受体密度与亲和性等 (Phelpsetal.19
A A V 衣壳肽展示库、易错 P C R 和 D N A 改组 。可通过自然突变和重组产生不同组织嗜性的A A V 血清型,从而将 A A V 转导到一些难感的细胞类型中去。另外,可利用血清同
核移植技术所依赖的理论基础是来源于同一胚胎或细胞系的所有细胞核都含有与受精卵完全相同的遗传信息,从基因组成上应该具有与受精卵一样的指导个体发育的全部潜 能 。当供
本章所谈的技术可以在局麻下记录皮层及皮层下结构,如丘脑、基底神经节和头端脑干神经元的活动,在记录的同时,可以要求病人做不同的运动和脑力活动,并且可以让其报告脑内
荧光原位杂交(FISH)需要核酸探针,包括直接用荧光素标记或者可以间接与荧光素相连接的脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)或核酸类似物。通过探针核苷酸与靶序列的核苷酸
反转录病毒能非常好地被用来作为基因导入的工具是因为它们有特定的生命周期和能有效整合进入靶细胞DNA的能力。反转录病毒的基因组两侧连接着两个调控区,也被称作长末端重
本试验方案描述了几种产生补体稳定的慢病毒载体的方法,这些方法是通过利用含有补体调节蛋白CD55 (降解加速因子, D A F ) 的融合包装蛋白来产生假型病毒质粒,或是采用天
液氮研磨应用于有关脱氧核糖核酸(DNA)分离
本章关注的是胚胎生殖细胞(E G C ) , 目的是提供一系列实验方案,利用这些实验方案有望了解E G C 与其他人干细胞之间的关系。 作者: 斯泰赛等,主译:章静波,本实验来自
蛋白质的性质是多种多样的,这使得使用平行方法表达和纯化蛋白质具有挑战性。平行方法尤其可以应用在需要一种目标蛋白质的多种衍生物,以及需要多个同系物时。典 型的方案
从相应的基因转录获得了mRNA,再通过逆转录得到的探针,称为cDNa 探针(cDNa probe)。与基因组探针不同的是,cDNA探针不含有内含子序列。
DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出3
在蛋白质组学的研究中,所有富集技术的一个关键步骤是亚细胞的分级分离,它对于胞内细胞器和多蛋白质复合物的分析是尤其重要的。为了降低样品的复杂性,亚细胞的分级分离应
有效地传递ΦC31整合酶和供体质粒到感兴趣的受体组织或细胞仍然是这一整合系统中最具挑战性的内容。不像利用病毒的方法对基因组进行操作,用 ΦC31整合酶几乎总是需要一个
蛋 白 质 的 大 小 或 表 观 分 子 质 量 也 许 是 最 常 用 来 区 分 分 子 性 质 的 。作 为 许 多 分 离 方 法的 基 础 ,分 子 质 量 或 者 仅 仅 分 子 大 小 就 可
膜蛋白提供了相应的分子机制,使得有用的分子能够可控地进入细胞,并且允许细胞内的产物输出到胞外。细胞膜上的酶合成了组成细胞膜的分子 (如饱和与不饱和脂肪酸、憐脂、甘
疏水作用层析(hydrophobic interaction chromatography, H I C )是蛋白质纯化技术中一个非常有价值的工具。 H I C 用于蛋白质纯化的规模很广泛—分析及制备规模均可。H I
总结IMAC的应用领域,包括蛋白质分级分离和蛋白质组学、蛋白质固定和检测,以及一些特殊应用,如免疫球蛋白的纯化和Chelex方法。 作者: 伯吉斯等,主译:陈薇,本实验来自
描述了用原核显微注射制备转基因小鼠的技术。原核显微注射,包括注射DNA到单倍体原核受精卵,是一个已被广泛接受的技术。构建转基因鼠可用简单的启动子/cDNA, 也可用大的
本书所介绍的S D S ——P A G E 方法将满足本领域大部分应用的需要。 作者: 伯吉斯等,主译:陈薇,本实验来自「蛋白质纯化指南」
这一章描述利用慢病毒载体转移基因和小干扰RNA (siR N A )表达盒到胚胎植人前的晶胚。这一技术使快速转基因动物和转基因下调动物快速发展 作者:T.弗里德曼等,译者:殷勤伟
畸胎癌 (teratocarcinomas) 是一种结构多样性肿瘤,通常由形成畸胎瘤(teratoma) 的一系列分化的细胞类型和一群称作胚胎癌细胞(EC) 的干细胞构成。在肿瘤内胚胎癌细胞进行
生 物 可 降 解 纳 米 颗 粒 是 一 种 胶 体 颗 粒 ,一 般 直 径 在 IOOnm左 右 ,可 以 由 聚 乳 酸 -聚经 基 乙 酸 (P L G A ) 或 聚 乳 酸 等 生 物 可 降 解 聚 合
米非司酮诱导的基因调节系统(M I G R S ) 是通过抗孕酮药—米 非 司 酮 (M f p )来调控耙基因表达的体系。该体系利用一种反式激活嵌合蛋白质,此蛋白质重组了部分人
描述在实验室分离氧敏感铁-硫蛋白FNR所使用的方法。 作者: 伯吉斯等,主译:陈薇,本实验来自「蛋白质纯化指南」
通过静脉注射特洛伊木马脂质体(Trojan horse liposome, T H L , 也 称 为 P E G y -Iates免疫脂质体, P I L ) 包裹的DNA, 非病毒载体质粒DNA可经血管途径穿过血脑屏障传
来源:《蛋白质与蛋白质组学实验指南》
DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的
IMVIC 是吲哚试验(indol test)、甲基红试验(methyl red test)、伏-普试验(Voges-Prokauer test)和柠檬酸盐试验(citrate test)四个试验的缩写。i 是在英文中为了发
大量非病毒体系已经被用于体外培养细胞或体内特定细胞的核酸传递。它们在毒性、免疫原性和靶向特定细胞表面受体或细胞种类的能力等方面具有很大差异。 一 类含有 P-环糊精
甲基化特异性的PCR法(Methylation-Specific PCR,MS-PCR)是 Herman等(1996)在使用重亚硫酸盐处理的基础上新建的一种方法。该方法敏感性高,主要用于作定性研究。甲基化
X-射线衍射法是测定蛋白质晶体结构的极其重要方法。生物大分子X射线晶体学是揭示分子结构与功能的科学。目前还没有一种工具能够用它直接观察到蛋白质内部的原子和基团的排
Oct4, Klf4, Sox2, and c-Myc 转录因子的异味表达可以使小鼠体细胞重新编程诱导功能干细胞。(1)有利于功能干细胞的再分化,充分利用资源。(2)降低外源性基因整合风险。
端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构,端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列,这一序列在生物进化中有高度的保守性(人重复序列为TTAGGG)。已确认端粒在保护基因
将初步纯化的SPA与HRP用过碘酸钠氧化法(交联反应时间在22℃下5h)交联可得到PPA。
食品工厂要求所排放的废水的pH 值在6.5-8.5 之间,在果蔬汗饮料厂、碳酸饮料厂、乳制品厂、啤酒厂等的生产过程中,常用大不认进行清洗容器、设备。此外,还会用到盐酸、硝
利用Lipofeetamine2000将构建的psj-EGFR载体转入A549细胞中,应用实时定量荧光PCR、免疫荧光和流式细胞仪检测EGFR基因mRNA和蛋白水平的表达,并采用四甲基偶氮唑蓝显色法(M
胞外的信号被受体接受,通过Gs或Gi传递给AC,使其活化或抑制;AC被激活后,产生cAMP,cAMP激活PKA,使蛋白质磷酸化,产生细胞反应; cAMP被PDE水解而信号终止。
一些植物之所以比较难提取出高质量的RNA与这些组织中富含的一些成分有关,常见的有酚类化合物,多糖以及某些尚未明确的次级代谢物,另外就是富含较高活性的RNase的组织。
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是广泛存在于各种细胞中的一条信号转导途径,由一组级联活化的丝/苏氨酸蛋白激酶组成,对于细胞周期的运行和基因表达具有重要调控作用。M
大多数细胞系在pH7.4生长最好,不同细胞株之间差别不大;但一些正常成纤维细胞系在pH7.4~7.7生长最好.而一些转化细胞可能在pH7.O~7.4生长得会更好些「Eagle1973].据报道上皮
基因治疗是指通过调控目的基因的表达,在基因水平上抑制、替代或补充缺陷基因,从而恢复细胞、组织和器官的生理功能。基因治疗有体内 (h W w ) 和体外 (ex v/vo 俩 种 途径
通过辅助病毒来感染病毒制造细胞的克隆,含 有 和 基 因 的 稳 定 的 病 毒 制 造细胞系和r A A V (重组腺联病毒)载 体 为 r A A V 储存库的建立提供了一个可靠而有效的程
造血干细胞移植是治疗恶性血液系统疾病、肿瘤放化疗及重症放射病的有效方法 Q然 而 ,由于组织相容性抗原的存在,在同种异基因干细胞移植后常发生严重的移植物抗宿主病 (G
提供一些如何使用微型SIV 包装系统和SIV 基因转移载体来获取由S IV 发展来的高滴度和安全的慢病毒载体的方法。作者:T.弗里德曼等,译者:殷勤伟等,本实验来自「基因转移」
饲养细胞是胚胎来源的干细胞包括胚胎癌细胞 (EC)、胚胎干细胞 (ES)、原始生殖细胞 (EG) 等细胞在体外保持对称分裂不分化状态的必要条件。其作用机制不完全清楚。对于小鼠胚
这一章详细地讲述了用于基因转染和基因治疗中的辅助病毒依赖性腺病毒载体(H D A d ) 的制备、扩增和大规模生产。在这一过程中,使用了适合悬浮培养的116生产细胞、 A d N G
环境代谢组学(environmental metabolomics) 是代谢组学的分支,主要研究有机体对环境应激过程中的代谢变化。因为这种方法不依赖于有机体基因组的知识,所以对于研究一个生
这一章介绍通过使用2A 多肽连接的多顺反子载体从单一可读框来表达多重蛋白质的方法。当这些小的序列被克隆到基因间区时,它们允许通过在2A 多肽序列中的一个新颖的切割方式
当前,腺 病 毒 (A d ) 感染细胞的生命周期和生物学特征已经被研究得很清楚。在 A d 病毒感染和转基因的表达中,存在三个必需的连续步骤:①病毒结合到细胞表面受体上;②
从哺乳动物组织和果蝇中进行 RNA 制备的标准方法的一种改进,主要包栝虫体的迅速裂解和 RNA 的均一性纯化。
本章讲述了如何利用无辅助病毒包装体系来构建H S V /A A V 杂合载体,同时也讨论了其与传统的H V S /AAV扩增子载体相比的优点和缺点。作者:T.弗里德曼等,译者:殷勤伟等,
空 泡 病 毒 (F V ) 是非致病性的反转录病毒,它能将基因有效并安全地转移到不同物种的不同类型的细胞中。这些病毒有着与其他反转录病毒不同的独一无二的复制机制 ,这是
慢病毒载体可以被设计成复制不完全或者是复制条件依赖型(可运动型)载体。 HIV-2 载体在抗H IV 的基因治疗中更加有效,是因为它比相应的HIV-I 载体的致病能力弱,而且在感
本章讲述了如何利用无辅助病毒包装体系来构建H S V /A A V 杂合载体,同时也讨论了其与传统的H V S /AAV扩增子载体相比的优点和缺点。作者:T.弗里德曼等,译者:殷勤伟等,
水泡性口炎病毒的外壳融合G蛋白(VSV-G) 可以用于制备假型反转录病毒和假慢病毒,这种糖蛋白也可以单独作为有效的基因转移载体。在没有其他病毒成分存在的情况下,经 VSV-G
小 R N A 病毒包括一大群小的、无荚膜的、正义单链R N A 病毒。小 R N A 病毒的生活周期很快,完全在细胞质内进行,而不需要整合到宿主细胞的基因组或经历一个核相。由于它
本章描述基于灭活H V J (hemagglutinating virus of J a p a n, 日本血凝病毒,又称Sendaivirus, 即仙台病毒)融合介导载体的构建技术。 H V J 脂质体由含D N A 的融合脂质
基 因 治 疗 研 究 的 核 心 在 于 合 适 传 输 体 系 的 研 发 。尽 管 目 前 大 多 数 临 床 实 验 使 用 的 都是 病 毒 载 体 体 系 ,但 是 ,阳 离 子 脂 质 体 由 于
利用 D N A /磷 酸 韩 (C a P O 4) 共沉淀的方法来转染细胞是一个被广为描述的方法。虽然这种共沉淀法在3〇多年前就已经被提出了(G r a h a m and van der E b 1973),但
天然多糖作为基因输送的载体正被广泛研究。透明质酸 (H A ) 无炎症反应和无免疫原性的特点从临床应用角度讲显得尤为重要。此外,体内存在透明质酸酶,可促进透明质酸载体
感染了杆状病毒的草地贪夜蛾(Sf9 ) 昆虫细胞的细胞核提取物编码猿猴病毒40(S V 4 0 ) 的主要外壳蛋白(V P l )。在 有 M g C l 2、 CaCl2 和 A T P 存在时,这些核提取物
为了实现靶基因的转运,对慢病毒载体做了两类表面修饰:①利用其他病毒的定向性,结合异源病毒糖蛋白(称之为假型);②异源的多肽与病毒糖蛋白融合使得慢病毒颗粒能重新靶
水溶性脂高分子和脂肽是一类非病毒基因载体,它结合了脂质材料增加D N A 对细胞膜的通透性以及聚阳离子与D N A 缩合并促进基因在内含体逃逸的特点。通过氯甲酸胆固醇醋与分
复 合 聚 乳 酸 -聚 羟 基 乙 酸 (P L G A ) 和 聚 乙 二 醇 (P E G ) 衍 生 物 的 纳 米 颗 粒 已 经 被用 作 为 透 黏 膜 的 基 因 载 体 。这 种 纳 米 载 体 的 优
P E I 由于其聚阳离子的本质,它和带负电的D N A 分子通过静电相互作用形成纳米颗粒,进一步帮助D N A 通过胞外及胞内的屏障。最近,发展受体介导的内吞、内含体逃逸以及核
线性聚乙烯亚胺(L P E I )是适合大量细胞系和原代细胞的非常有效的转染试剂,它同样也适用于体内局部或系统基因输送。与许多其他非病毒转染方法不同,L P E I 对有丝分裂的
借助 一 种 鸡 胚 电 穿 孔 的 新 技 术 ,成 功 地 将 基 因 导 入 到 胚 胎 中 。与 之 相反 ,由 于 哺 乳 动 物 的 胚 胎 被 母 体 的 子 宫 包 围 ,在 发 育 的 大
为了提髙转导效率,一个叫假型形成的策略被采纳了,它是将反转录病毒颗粒与其他病毒编码的外壳蛋白相结合。因为这些假型载体颗粒用了不同的表面受体进人细胞,与含有原始的
固体脂质纳米颗粒(S L N ) 和阳离子脂质体以及阳离子聚合物等基因载体相比有很多技术上的优势。然而,在缺少溶内体试剂(如氯喹)的情况下,即 使 S L N 载体的组分经过优
P E G 化的聚左旋赖氨酸和D N A 的纳米颗粒是水溶性的,在生理盐水和组织液中稳定 存 在 ,转 染 不 分 裂 的 细 胞 ( Liu et al.2003),显 示 很 小 的 毒 性 ( Ziady e
本章描述纳米脂质颗粒(N L P ) 包封核酸的详细实验步骤。这种 N L P 带有聚乙二醇(P E G ) 屏蔽层,并含有生物敏感脂质和配体,用于实施D N A 的靶向输送。与传统的阳离子
聚阳离子是一类有效的非病毒基因传递载体。这些载体因分子质量、化学结构、聚合物/DNA比例、分子结构而异,具备键合靶向基团的能力。这些载体能与不同的质粒复合,并将其转
由于其遗传的简单性,噬菌体通常用于治疗性基因转移的载体遗传性优化方法中。另外,由于噬菌体的繁殖是菌株特异性的,因此不同宿主对于遗传改造、修饰甚至对用遗传筛选来进
发 展 安 全 有 效 的 基 因 传 输 系 统 是 确 保 临 床 基 因 治 疗 成 功 的 先 决 条 件 。尽 管 病 毒 载 体的 转 基 因 效 率 高 ,但 出 于 安 全 性 及 病 毒 免
电转染可用于基因功能、启动子活性和基因调控的研究,它还可用于建立转基因或基因敲除胚胎干细胞,以及传递编码R N A 的肿瘤抗原到树突状细胞中,用于肿瘤疫苗的研究。电转
泡 沫 病 毒 (F V ) 或 spumavirus,是作为整合型病毒载体发展的非病原的反转录病毒。 F V 载体几个潜在的优势包括广宿主范围、强大的包装能力,以及稳定的包含双链D N A
组织特异性和血管生成相关的受体的功能血管图谱已经被较广泛地推广,并通过分离受体、细胞系、实验动物模型的筛选技术、体内外临床样品和直接用于患者的样品的分离技术进行
光 化 学 内 化 (photochemical internalization, P C I ) 可以通过光定向破坏细胞的内吞小泡的机制得到高效的转染(Berg et al.1999)。这项技术的原理是先将光敏剂定位于
特 定 位 点 的 基 因 敲 除 和 非 病 毒 D N A 传 送 技 术 在 研 究 蛋 白 质 功 能 中 特 别 重 要 ,同时也 可 以 作 为 未 来 治 疗 的 手 段 。很 多 技 术 的 问 题
在对动物细胞进行核酸转运和基因表达时常用的各种病毒或非病毒手段中,裸质粒D N A 技术具有许多优点。首先,质粒 D N A 可通过D N A 重组技术直接进行操作,对技术与设备
磁力转染的定义是,通过磁力介导,用磁性颗粒运送核酸或核酸载体。载体可以结合到磁性颗粒上,磁性颗粒通常是氧化铁纳米颗粒,大多数情况下通过非共价键进行连接。磁力可以
近几年,应 用 R N A 干 扰 技 术 (R N A i ) 进行的功能基因组研究开展得非常广泛。R N A i 在各种调节基因表达的技术中是最新的也是最成功的,这些技术一般都是以反义作
通过微注射进行导人可以用于任何类型的贴壁细胞,包括原代细胞。由于任何靶基因的 siRNA可以简单、快速地获得,因此,在几天内研究任意一种贴壁细胞的任一基因敲除后的多种
声孔效应可能不适用于将基因导人带有腔形成结构或开放性结构的组织中。对神经管和肢外胚层的声孔效应经常引起弥散性基因表达,这是由于注射的微气泡在超声处理前发生扩散。
在浓缩样品的同时,可以去除核酸并且能够使目标蛋白质得到一定程度的富集。我们发现一种作用显著的树脂,即 Affi-GelBlue。多年来,Affi-GelBlue作为亲和层析树脂已经用于
将基因转移到细胞并表达新的蛋白质,或以此改变内源性蛋白质的表达水平,可以调节细胞的生理功能。这种方法对研究细胞功能十分有益,同时在大量疾病治疗方面具有良好的应用
用 “睡 美 人 ” (sleeping b e a u ty , S B ) 转 座 子 高 效 输 送pol III驱 动 的 s h R N A 表 达 框 的 方 法 。这 一 体 系 的 优 点 包 括 它 用 标
RheoSwitch 系统是蜕皮激素受体基础上高效率的基因调节体系,该系统被合成的小分子配体激活。受体由蜕皮激素受体蛋白和R X R 蛋白以双杂交的形式异二聚体化组成 ,在配体存
成功的基因转导需要有效的转运和外源基因的长期存在,才能使生理相关和被恰当调控表达的治疗基因在受体祀细胞内得以维持。最佳的基因转运平台应该具有无限的有效载荷_ 力而
染色质可及性通常也理解为染色质的开放程度。DNA 的复制以及转录,都需要将染色质的紧密结构打开,从而允许一些调控蛋白(比如转录因子和辅因子)与 DNA 结合。这部分被打
荧光免疫层析(Fluorescent Immunoassay,FIA)是一种基于抗体-抗原特异性识别的分析技术,通过荧光信号来检测和定量移动的目标分子。该技术结合了免疫学、荧光学和生物化
伊文思蓝染色是的用途非常广泛,在小动物的活体实验中涉及到心血管系统、神经系统、骨骼肌系统等疾病的研究方法,这里我们主要介绍了伊文思蓝染色在检测血脑屏障通透性中的
E S 和 E C 细胞分化的研究都促进了实验技术的发展。 E S 细胞对分化诱导和细胞死亡非常敏感,因此建立实验方法是一个漫长而艰辛的过程。 E C 细胞显著特点和它们类似 于 E
血脑屏障 (Blood-Brain Barrier, BBB) 是由微血管内皮细胞、基底膜和周围星形胶质细胞组成的一种高度特化的生物屏障,能够保护中枢神经系统 (Central Nervous System, C
描述几种用来产生和区分从hESC分化而来的心肌细胞的方法,它与把心肌细胞分离成单细胞悬液的方法一样有效,制备单细胞悬液可以用于抗体标记区分细胞和电生理检测细胞,它也
作为噬菌体衍生的酶,内溶素本质是一种蛋白分子,其通过分解细菌细胞壁的肽聚糖成分,帮助噬菌体颗粒从细菌宿主释放,可在噬菌体复制过程中表达,破坏细菌细胞壁肽聚糖的关
用小鼠鼠尾或鼠趾或组织进行小鼠基因型鉴定
斑点杂交(dotblot)是一种检测、分析和鉴定 DNA、RNA 和蛋白质的技术,通过显影斑点的有无及颜色的深浅来判断是否有杂交及其杂交强度。作为目前高等真核生物和植物中最丰
毒力表示病原体致病能力的强弱,构成细菌毒力的物质称为毒力因子,主要有侵袭力(病原菌在机体内定殖、突破机体防御屏障和内化作用、繁殖和扩散的能力)和毒素。 病原菌毒
荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是一门新兴的分子细胞遗传学技术,在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术,具
环介导恒温扩增是指在 60~65 ℃ 等温环境下,DNA 处于动态平衡状态,在此温度下利用 4 种特异引物依靠一种高活性链置换 DNA 聚合酶,使 DNA 在短时间内进行核酸扩增的技术
DNA 损伤
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dsRNA 的制备
小鼠离体心脏灌流是一种常用的生理学实验,用于评估小鼠心脏的生理功能和药物效应。实验通过将小鼠心脏从体内取出并灌注生理盐水,模拟体内环境,以评估心脏的收缩和舒张功
暂无
六胺银染色又称(Periodic-acid silver methenamine)PASM 染色。标本经高碘酸氧化后,使真菌和其他机会性生物的细胞壁内的粘多糖暴露出醛基,醛基将六胺银还原为黑色的金
等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry,ITC)是一种常用的生物物理学实验技术,其通过测量生物分子之间热交换的过程来研究它们之间的相互作用。它可以测量生
小鼠 SOD 测定采用酶联免疫吸附试验(ELISA)。通过双抗体一步夹心法,在包被 SOD 抗体的 96 孔板中,加入标本、标准品、HRP 标记的检测抗体,通过恒温培养箱温育并彻底洗
往先天性免疫缺陷的裸鼠皮下注射一定量的肿瘤细胞形成肿瘤,从而观察肿瘤的发生发展情况以及药物干扰情况等等。
Evans Blue 染色是的用途非常广泛,在小动物的活体实验中涉及到心血管系统、神经系统、骨骼肌系统等疾病的研究,这里我们主要介绍了 Evans Blue 染色联合 TTC(2, 3, 5-氯
NO(Nitric Oxide,NO)广泛分布于生物体内,包括神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中,尤其是神经组织中较为丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质,发挥信号传递的
细胞辐照指的是用 X 射线,B、y 射线等电离射线来辐射细胞的过程。
作为噬菌体衍生的酶,内溶素本质是一种蛋白分子,其通过分解细菌细胞壁的肽聚糖成分,帮助噬菌体颗粒从细菌宿主释放,可在噬菌体复制过程中表达,破坏细菌细胞壁肽聚糖的关
HIV 耐药性检测可以进行表型或基因型检测,基因型检测是最常用的检测方法,该方法主要是通过 PCR 及基因测序的手段得到 HIV 耐药相关基因序列,分析基因组中与耐药相关的氨
B16F10 黑色素瘤皮下荷瘤模型操作简单,成本较低,可重复性强,实验周期相对较短,是研究黑色素瘤常用的动物模型。
凯氏定氮法是一种常用的化学分析方法,用于确定有机和无机物样品中的氮含量。它最初由丹麦化学家约翰·乔治·凯尔达尔(Johann Kjeldahl)于 1883 年发明并命名。该方法主
常与免疫学实验一起研究的技术。