Oct4, Klf4, Sox2, and c-Myc 转录因子的异味表达可以使小鼠体细胞重新编程诱导功能干细胞。（1）有利于功能干细胞的再分化，充分利用资源。（2）降低外源性基因整合风险。

操作方法

蛋白质转染法

原理

1. 研究表明，各种蛋白质都可以通过短肽结合的方式进入细胞，这种短肽可以介导蛋白质的转导。2. 各种亲溶剂化和再折叠技术处理包涵体蛋白表达在大肠杆菌中有生物活性蛋白发展到允许容易和大规模化生产治疗性蛋白。

材料与仪器

鼠成纤维细胞
丙戊酸 培养液
培养皿 移液枪 枪头 枪头盒 冰箱

步骤

1. 每个周期的成纤维细胞（最初细胞密度为5×10⁴个细胞/孔，第一次治疗是在夜间进行的用重组重新编程蛋白质（即 Oct4-11R, Sox2-11R, Klf4-（11R，和c-Myc-11R），在8mg/ml的补充或补充mESC生长培养基中供给 1mm丙戊酸（VPA）的蛋白质，和 可以显著提高编程效率的HDAC抑制剂。另一培养基没有VPA和抑制剂，两个培养基在下一个循环前培养36h。

2. 在完成四个重复的蛋白转导后，撞击蛋白质后处理过的细胞转移到辐照的mef饲料细胞并简单保存在mESC生长培养基中，直到克隆到30-35天。

3. 所形成的的小鼠成纤维细胞呈稳定的均匀的扩张，超过30代后，形成了圆形的紧凑的菌落。他们通过免疫化学细胞和染色表达了多能标记。

注意事项

所需的蛋白质和细胞都需要低温保存，以防止失活。

常见问题

1. iPSCs（特别是针对病人的）与ESCs类似，但相比之下更容易创建，在这种情况下是人类细胞，而且争议较少，存在生物医学的前所未有的机会医学研究和临床应用。实现了iPSCs需要改进的指导方法分化产生均匀性谱系特异性细胞类型的群体。

2.利用细胞内源性基因表达策略也可以更容易的重新编程所需的外生基因。

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