Scopes 发表了一种测定蛋白质消光系数（E) 的简便方法（Scopes,1974)。此法基于如下事实，即尽管蛋白质在 205nm 处的吸收大部分是由肽键造成的，但仍有一些吸收取决于其中的氨基酸。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

操作方法

消光系数的测定（Scopes法)实验

材料与仪器

透析缓冲液 牛血清白蛋白（BSA) 或σ32 溶液
干净的石英比色皿 分光光度计

步骤

材料与设备

牛血清白蛋白（BSA) 或σ³² 溶液，浓度约为 1mg/ml

干净的石英比色皿

分光光度计，可在 205nm 和 280nm 读数的

试剂

透析缓冲液

(配方，见"试剂的配制"，PP.184~189)

操作程序

1)BSA 溶液（~1mg/ml) 或未知浓度的待测纯蛋白溶液对 2X400 ml 的透析缓冲液透析 3~5 h, 充分搅拌。

2) 测定 A_280nm(应在 0.25~1.0 范围内)。

3) 小心地用透析缓冲液将蛋白溶液稀释 30 倍（例如，200ul 样品加 5.8 ml 透析缓冲液)，测定 A_205nm。

4) 用公式 E(1 mg/ml)_205nm=27.0+120(A₂₈₀/A₂₀₅)，计算 E(1 mg/ml)_205nm。

5) 计算：蛋白浓度=A₂₀₅/E(1 mg/ml)_205nm=

6) 计算：E(1 mg/1 ml)_280nm=A₂₈₀/蛋白浓度=

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