以高浓度接种细胞和微珠，然后按照要求进行稀释、搅拌和取样。

操作方法

微载体

原理

以高浓度接种细胞和微珠，然后按照要求进行稀释、搅拌和取样。

材料与仪器

起始培养物
生长培养基 微载体 搅拌培养瓶 磁力搅拌器

步骤

1. 按照所需最终培养液量的 1/3，以 2~3 g/L 混悬微珠。

2. 用胰蛋白酶消化和计数细胞，以正常接种浓度的 3~5 倍将细胞接种到微珠悬液中。

3. 以 10~25 rpm 将培养物搅拌 8 h。

4. 加入培养液，达到 0.7~1 g/L 的微珠浓度的最终容量。

5. 加快搅拌速度至 60 rpm。

6. 如果 pH 下降，关闭搅拌器培养 5 min，使微珠沉降下来，然后更换 1/2~2/3 的培养液。

7. 收集细胞：

(a)吸出培养液。

(b)通过沉降法清洗细胞。

(c)用胰蛋白酶和 EDTA 处理微珠。

(d)让微珠沉降。

(e)通过转动使细胞从微珠上脱落下来。

(f)通过混悬和离心清洗细胞。

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