分子排阻色谱法又称凝胶色谱法，是利用被分离物质分子大小的不同导致在填料上渗透程度不同使组分分离；常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，根据固定相和供试品的性质选用水或有机溶剂作为流动相。

操作方法

基本方案

材料与仪器

蛋白质
SE缓冲液
层析柱

步骤

1.  用已脱气HPLC级水洗去SE柱的贮存溶剂，流速1 ml/min。在室温以已脱气的SE缓冲液在1 ml/min 流速平衡SE柱30 min 或直至基线稳定。

2.  注射100 μl  缓冲液进行一次空白样品的假层析，检测器设定在210~220 nm，0.1~1.0 AUFS。适宜的设定一般是：100 pmol 时为0.1AUFS，500 pmol 时0.3，1 nmol 时0.5，2 nmol 时1.0 ；作图速度为0.5 cm/min。

3.  在2 000 g 离心蛋白标准或蛋白混合物5 min 注射100 μl 上清，并重复步骤2操作。收集每个层析峰于不同的聚丙烯管子，并确定峰的洗脱体积。
4.  各分部组分脱盐，并用Speedvac蒸发器除去溶剂。   5.  最后一个洗脱峰的保留时间不应超过第1个峰的2倍，如果不是这样的话，流动相加20%甲醇以抑制蛋白与介质的结合。

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