以肉眼和倒置显微镜观察培养物，若有指征，如PH降低，则去除旧培养基加如新鲜培养基，再重新放入温箱培养。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

操作方法

方案13.1单层培养细胞更换培养液实验

原理

以肉眼和倒置显微镜观察培养物，若有指征，如PH降低，则去除旧培养基加如新鲜培养基，再重新放入温箱培养。

步骤

材料

无菌

培养的细胞：A549细胞，以2×10^4ml接种到25cm2培养瓶后4天……4瓶

生长培养液……………………………………………………100ml

例如：Eagle1×MEM含Hanks盐类和4mmol/L H2CO3，无抗生素

如果培训程序能接上，用联系3配制的两种培养基，1瓶保存在4℃一周，1瓶保存在37℃一周

移液管，各种刻度，清洗好，塞了棉花。如果是玻璃的，按照大小1ml、5ml、10ml、25ml，分类装在方形吸管盒中。如果是塑料的，单个包装并分类放在架子上

如果具备真空泵或真空管线，则用不塞棉花的吸除培养液的吸管

非无菌

吸液器或吸耳球（图5.5、图6.6）

连接废液瓶与真空管线的管子，或连接废液瓶与蠕动泵的管子（见图5.1~图5.3）

装了70%乙醇的喷壶

无短绒的拭干子或抹布

吸水纸巾

带水和消毒剂的吸管筒
防乙醇的记号笔

笔记本、笔、操作步骤等

操作步骤
1.确认干净，并以70%乙醇擦拭，准备好超净工作台。

2.实验所需的试剂及材料，瓶子以70%乙醇擦拭后立即放进超净工作台（见方案6.1）。

3.仔细观察培养物是否有污染或衰退迹象（图13.1和图19.1）。

4.检查前述更换培养基的标准——PH和细胞密度或浓度——以你对于该培养物行为的了解决定是否更换培养液。弱必须换液，则如下进行：

5.将培养物放于无菌工作区域。

6.打开盖。

7.取无菌吸管，插上吸耳球或吸液器，或选择与真空或泵连接的不塞棉花的吸管。

8. 吸旧培养基至废液缸（图6.8），或，更可取，通过外边泵连接到超净台内的吸管吸除培养液（图5.2、图5.3）。

9.弃吸管。

10. 打开培养液瓶盖。

11.去新吸管，加入同体积的新鲜培养基。如果无需检查细胞生长，将培养基预热至37℃是非常重要的。盖好瓶盖。

12.弃吸管。

13.盖好培养瓶和培养液的瓶盖。

14.将培养物重新放回孵箱。

15.在记录单或实验记录本上完成观察及换液记录。

16.清走所有吸管、玻璃用品等，擦拭工作面。

提示

当培养物密度低或生长缓慢时，最好进行半量换液——即在第8步只吸除一半旧培养基，在步骤11补入相同体积的新鲜培养基。

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