本实验来源「实用流式细胞术彩色图谱」 王书奎、周振英主编。

操作方法

培养细胞单细胞悬液的制备

材料与仪器

胰蛋白酶 细胞
EDTA·2Na PBS
离心管

步骤

一、培养细胞的特征

一般细胞培养分为悬浮培养和贴壁培养，由于细胞的增殖有可能形成大小不等的细胞团块或连接成片。如果两个或多个细胞粘连在一块或细胞碎片过多都将影响 FCM 结果，进而导致实验失败。所以，制备合格的培养细胞单细胞悬液十分重要。

二、培养细胞样品的制备程序

1. 将培养细胞用 0.04% 乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA·2Na）或 0.29% 胰蛋白酶消化 3~7 min（根据室温情况而定），至光镜下见到贴壁细胞间出现筛状间隙为止，弃去消化液，加 PBS 液。

2. 用吸管将细胞从瓶壁上轻轻吹打下来，并移入离心管中。

3. 短时低速离心，即 800~1000 r/min，5 min。

4. 弃上清，加 pH 7.4 的 PBS 液 5~8 ml，低速短时离心，800~1000 r/min 离心 3~5 min；重复 2~3 次，以去除细胞悬液中的细胞碎片。

5. 加少许 PBS 液，将沉淀细胞轻轻吹打均匀。加固定液或低温保存待用。

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