希尔反应（Hill reaction）是绿色植物的离体叶绿体在光下分解水，放出氧气，同时还原电子受体的反应。氧化剂2，6－二氯酚靛酚是一种蓝色染料，接受电子和H＋后被还原成无色，可以直接观察颜色的变化，也可用分光光度计，还可以对还原量进行精确测定。

操作方法

希尔反应的观察实验

原理

希尔反应（Hill  reaction）是绿色植物的离体叶绿体在光下分解水，放出氧气，同时还原电子受体的反应。氧化剂2，6－二氯酚靛酚是一种蓝色染料，接受电子和H＋后被还原成无色，可以直接观察颜色的变化，也可用分光光度计，还可以对还原量进行精确测定。

材料与仪器

菠菜
2-6－二氯酚靛酚 石英砂 三羟甲基氨基甲烷 蔗糖 NaCl
研钵 刻度试管 漏斗 纱布 小烧杯 剪刀

步骤

一、材料、仪器设备及试剂

1.材料

菠菜或其他绿色植物新鲜叶片。

2.仪器设备

研钵，刻度试管，漏斗，纱布，小烧杯，剪刀。

3.试剂

（1）0.1％ 2，6－二氯酚靛酚，　石英砂。

（2） 提取用的缓冲液：内含0.05 M tris（三羟甲基氨基甲烷），pH7.5，0.4 M 蔗糖，0.01 M NaCl；

二、实验步骤

1. 首先取冰放入不锈钢盆中，然后装入塑料袋里，再将预冷的研钵置于冰上。

2. 取12克新鲜菠菜叶，洗净擦干，去中脉剪碎放入座在冰中的研钵里，加10  ml （预先冷冻的）提取液。

3. 迅速研磨破碎细胞（破碎一定要彻底），再用约10  ml 冷冻提取液混匀，得悬浮液。将悬浮液通过三层纱布，过滤到小烧杯中。

4. 滤液装入一支离心管中，1000转/分离心3－5分钟（离心管一定要配平），将上清溶液装入另一支离心管（尽量去除杂质，宁可损失一部分溶液，也不要将沉淀移入离心管），弃去沉淀（未破碎的细胞及组织残渣）。即得到叶绿体悬浮液。

5. 取试管两支，每支试管中加入叶绿体悬浮液5  ml 。

6. 加 0.1％ 2，6－二氯酚靛酚溶液5－6滴，摇匀。将其中一支试管置于直射光下，另一支试管置于暗处，注意日光下的试管中溶液颜色变化。5－8 M in 后，将置于暗处的试管取出，比较两试管溶液颜色变化，并解释原因。

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