实验方案(Protocols)
纤维素的高碘酸活化实验
纤维素的高碘酸活化实验
这种方法适用于具有临位二醇结构的材料,如纤维素、琼脂糖、葡聚糖。高碘酸盐氧化可形成乙醛基团,与氨基基团反应形成希夫碱,并通过硼氢化还原而稳定。来源:《酶学实验手册》
操作方法
基本方案
材料与仪器
纤维素粉 步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」 将 2 g 纤维素悬浮于 40 ml 0.1 mol/L NaHCO3-0.06 mol/L NaIO4 中,黑暗条件下放置 2 h,然后在玻璃料上用 0.1 mol/L pH 9.0 碳酸钠缓冲液冲洗。在 40 ml 缓冲液中加入待固定的蛋白质(约 1 mg/ml),室温振荡过夜。为去除希夫碱,在溶液中加入 2 ml NaBH4,室温振荡 30 min。之后再次加入 2 ml NaBH4,室温振荡 30 min。用 0.1 mol/L pH 4.0 乙酸盐-乙酸、PBS 和 0.05% 的吐温 20 冲洗固体材料。 常见问题 试剂: 0.1 mol/L NaHCO3-0.06 mol/L NaIO4(NaHCO3,Mr=84.0;NaIO4,Mr=213.9;8.4 g NaHCO3 ,12.8 g NaHCO3 溶于 100 ml H2O) 0.1 mol/L 碳酸钠缓冲液(NaHCO3-Na2C03),pH 9.0 NaBH4 溶液(0.1 g NaBH4 溶于 10 ml 0.1 mol/L NaOH,现配) 0.1 mol/L 乙酸钠-乙酸,pH 4.0 PBS(磷酸缓冲液:10 mmol/L 磷酸二氢钾-钠,pH 7.2,0.8% NaCl,0.02% KCl) 0.05% 吐温 20 溶于 PBS 如需了解更多产品详情,请前往阿拉丁官网查询。
NaHCO3-NaIO4 碳酸钠缓冲液。NaBH4 溶液 乙酸钠-乙酸 PBS
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