将细胞接种入滤膜培养皿内，在多孔培养板中以过量的培养液进行培养。

操作方法

滤膜培养皿

原理

将细胞接种入滤膜培养皿内，在多孔培养板中以过量的培养液进行培养。

材料与仪器

每平方厘米滤膜约0.5×1000000个细胞
生长培养液
滤膜培养皿 多孔培养板 弯镊 滴管

步骤

1. 将滤膜培养皿放入培养板或培养皿中。

2. 加入培养液，将培养皿倾斜，使培养液充满滤膜下方的空间，尽量置换出空气。加培养液至滤膜水平（6 孔板每孔 2.5 ml；24 孔板每孔 1.0 ml )。

3. 将培养板水平放置，在直径为 25 mm 的滤膜上加入 2 ml 含有 2x10⁶ 个细胞的培养液，在直径为 6.5 mm 的滤膜上加入 200 ul含有 5x10⁵ 个细胞的培养液，小心不要穿破滤膜。

4. 将培养板放在保护盒中，然后置于湿润的 CO₂ 培养箱中培养。关键是避免震荡保护盒，而且培养物不应在培养箱中移动，以免溢出和引起污染。

5. 在 3~5 d 内可形成单层，组织型分化（如极性转运）可能需要 5~10 d 或更长时建立。

6. 可无限制地维持培养，每 3~5 d 更换培养液或将嵌套转移到新的培养孔或培养皿。

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