实验方案(Protocols)

细胞的 PFA 固定实验

简介

当纯净甲醛在水溶液中溶解时,会自动聚合成长链的多聚甲醛。其长度不一,在水中同时进行聚合与解聚反应。甲醛易溶于脂类物质,因此能穿过细胞膜进入细胞内。用多聚甲醛固定细胞时,能使细胞内的自由氨基基团发生化学交联。当不同的分子发生交联时,形成一网状结构,把细胞的各个结构成分连接起来。

操作方法

悬浮法

材料与仪器

细胞悬液
PFA PBS
载玻片 加湿盒 玻璃染色盘

步骤

1.  吸取浓度为2×107细胞/ml 的细胞悬液10 μl,滴于多聚L-赖氨酸包被的载玻片上。置于加湿盒中,使细胞静置30 min。 
2.  将玻片放入玻片架,浸于盛有4%PFA固定液的染色用玻璃盘中,室温固定 20 min。   3.  将玻片架移至另一盛有3×PBS的盘中,放置2 min(此步终止PFA固定作用)。

4.  将玻片架移至一新的含1×PBS的盘中,放置2 min。换1×PBS后,再放置2 min。
5.  在盘中相继加换50%、70%、95%、100%乙醇,在毎种溶液中放置5 min 以进行脱水。   6.  在空气中使玻片完全干燥,放于有干燥剂的玻片盒中,-70℃存放(可存数周)。


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探索主题: 细胞实验

Da — 若无特别说明,分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《细胞的 PFA 固定实验》. 阿拉丁知识库,更新于 2024年12月23日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/pfa-fixation-assay-of-cells.html
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