植物 DNA 的提取是植物分子生物学和基因工程研究的一种基本的技术，至今已有了数种方法如：CTAB 法、SDS 法、氯化节法、高盐低pH法、果胶酶法等。

原理

1、CTAB 法 

CTAB法即十六烷基三乙基澳化按法，CTAB 是一种阳离子去污剂，它能与核酸形成复合物，这些复合物在低盐溶液中会因溶解度的降低而沉淀，而在高盐溶液中可解离，从而使 DNA 和多糖分开，再用乙醇沉淀 DNA 除去 CTAB。在该法中使用的聚维酮 (PVP) 与多酚结合形成复合物，从而可有效避免多酚类化合物影响 DNA 降解。

2、SDS 法

相比于 CTAB，SDS 法更加方便简单。近年来科研者们提出了利用 SDSTris-Cl-EDTA 直接裂解细胞使其释放出 DNA 的方法，后续的 DNA 纯化过程中通常采用酚/氯仿处理，但对于植物 DNA 纯化不是一个很好的选择，因为酚的使用可降低 DNA 的提取效率和纯度。实验证明，若采用较大的离心力和较长的离心时间，然后用氯仿一异戊醇代替酚来去除变性蛋白质，可以克服由于酚的掺入及残留对以后酶切带来的困难。 

此方法最大的特点是：将 SDS 同时用作细胞膜的去污剂和蛋白质的变性剂，变性的蛋白质通过离心而不是酚抽提除去，使得整个操作过程变得简单快捷，比较温和，1 小时左右就可以获得纯化的植物 DNA。用这种方法得到的 DNA 能直接被限制性内切酶酶解，纯度较高，适用于分子生物学的研究。

3、氯化节法

氯化节法的提取获得率较高。原因可能为氯化节不仅与植物细胞壁上的多糖经基反应生成醚，而且与细胞液中多糖物质的All基反应破坏糖链，有利于 DNA 的释放和提纯。 

4、高盐低pH法

高盐低 pH 法是指以无机盐和异丙烯为提纯试剂提取 DNA 的方法。通常采用的无机盐为低 pH 的醋酸钾，用来沉淀蛋白质。该方法方便省时，所需样品量少。 

5、果胶酶法

这是一种利用果胶酶对植物破碎细胞进行抽提的技术。

操作方法

一种简单实用的提取植物DNA实验

原理

的提取是植物分子生物学和基因工程研究的一种基本的技术，至今已有了数种方法。此方法最大的特点是：将SDS同时用作细胞膜的去污剂和蛋白质的变性剂，变性的蛋白质通过离心而不是酚抽提除去，使得整个操作过程变得简单快捷，比较温和，1小时左右就可以获得纯化的植物DNA。用这种方法得到的DNA能直接被限制性内切酶酶解，纯度较高，适用于分子生物学的研究。本实验的目的是掌握DNA提取的原理和方法。

步骤

一、材料与方法：

1、植物材料：螺旋藻（Spirulina platensis）、水稻（Oryza sativa）和烟草（Nicotianatabacum）.

2、试剂和溶液：

（1）20×SSC：3mol·L-1柠檬酸钠，pH8.0：

（2）溶菌酶、10μg·μl-1Rnase、10%SDS（均为Sigma产品）；

（3）酚：氯仿：异戊醇=25：24：1

（4）TE：10mmol·L-1Tris-HCL、1mmol·L-1EDTA，pH7.6。

3、提取步骤：

收集对数生长期的螺旋藻细胞，悬浮于5倍体积（v/w）含2mg·mL-1溶菌酶的20×SSC中，室温保持10分钟，偶尔摇动混匀。水稻幼苗和烟草嫩叶在液氮中研磨成粉状后，立即用5倍体积的20×SSC悬浮，并轻轻拌匀。上述悬浮液在冰上先放置3分钟，然后加入10% SDS至终浓度为2%，混匀；继续放置10分钟后，在4℃用11000×g离心15分钟。上清液转移至新的离心管中，并用相同体积的TE稀释，再加入RNase至终浓度为10μg·ml-1，室温放置30分钟。11000×g离心15分钟，所得的DNA沉淀用70%的乙醇洗两次后，真空中抽干或自然干燥，最后溶于适量的TE中。

二、结果与讨论：

利用本方法，从烟草、水稻和螺旋藻中提取了DNA。因为整个过程的操作步骤较少，也较温和，减少了DNA被弄断的机会，所以所得的DNA分子量较大，大部分都比完整的λ噬菌体的DNA（48.5Kb）还大。另外，用此方法所提的DNA的OD260/OD280的比值1.8至1.9之间，并能被限制性内切酶酶切，显示有较好的纯度。

在使用本方法时，须注意下面的几个问题。当20×SSC的悬浮液中加入SDS至2%后，溶液中会出现白色絮状物质，表明蛋白质已经变性，这是本方法的主要特点之一。它通过变性后离心而不是常用的多次酚抽方法，将绝大部分的蛋白质除去。离心所得的上清液，需要用TE稀释，这是因为溶液中的盐浓度较高，如不稀释，RNase就无法起作用；而且在沉淀DNA时，如用乙醇会将溶液中的盐析出，如用异戊醇则形成两相的界面，将溶液中盐的浓度降低后，就解决了这些问题。但是，加大稀释TE的体积，对于DNA的产量并无非常明显的作用，用等体积的TE稀释即可。DNA抽提液经RNase酶解后，再用酚：氯仿：异戊醇抽提一次，用以除去剩余的蛋白质和酶。本方法适用于大量和微量的DNA制备。大量制备时，RNase酶解和酚：氯仿：异戊醇的抽提步骤可以在DNA浓缩一些后再使用，这样就较便于操作，并且节省RNase和酚。通常，用这种方法能从每克新鲜组织中提取到10至15μg的DNA。

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