实验方案(Protocols)
质粒提取
质粒提取
从细菌中提纯质粒DNA
原理
应用 质粒提取 操作方法 碱裂解法(质粒提取) 材料与仪器 溶液I 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 10mmol/LEDTA(pH8.0) 步骤 (一)细菌培养物的生长;(二)细菌的收获和裂解;( 三) 质粒DNA 的纯化 注意事项 溶液I可成批配制,每瓶约100ml,在10lbf/in2(6.895×104Pa)高压下蒸气灭菌15分钟,贮存于4℃。须确使细菌沉淀在溶液I中完全分散,将两个微量离心管的管底部互相接触震荡,可使沉淀迅速分散。 如需了解更多产品详情,请前往阿拉丁官网查询。强碱性条件下,质粒DNA和基因组DNA同时从细胞中释放出来,并发生变性。在pH中性,并有高盐浓度存在的条件下,质粒DNA会迅速发生复性,仍为可溶性状态,染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构,在去垢剂SDS作用下,染色体DNA与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀,通过高心去除沉淀后,再用酚氯仿抽提进一步纯化质粒 DNA,用异丙醇或乙醇沉淀可将之纯化出来。
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