文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。

操作方法

基本方案

材料与仪器

噬菌体
琼脂糖 LB NaOH SSC Tris·Cl
硝酸纤维素膜 培养箱

步骤

1.  通过系列等比稀释滴定噬菌体文库的滴度。   2.  重组噬菌体与铺平板的宿主菌混合于培养试管中（表一），于37 ℃温育20 min。
 
表一、噬菌体文库铺平板组分最佳配制方法   3.  按每个平板的噬菌体数决定筛选文库时将用到的平板数。

4.  该数目取决于文库中重组噬菌体的数目和目的克隆出现的概率。

5.  在试管中加入0.7%顶层琼脂糖，并迅速倾倒在37 ℃保温的LB上平板上，37℃培养约6~12 h，至噬斑布满平板，但大小适当互不相连。

6.  平板置于4℃1 h以上方可用于滤膜影印实验。   7.  用原珠笔在硝酸纤维滤膜上做好标记，标记面朝上。

8.  将滤膜覆盖在预冷的长有噬斑的LB平板上1~10 min 用20-G针头穿刺标明定位方向后。

9.  用平头镊子取出滤膜，面朝上轻放在纸巾或滤纸上，室温晾干10 min 以上。   10.  接着，滤膜转印面朝上，依次放在3张分别饱蘸下面3种液体的Whatman 3 MM 滤纸上，各1~2 min。
（1）0.2 mol/l NaOH / 1.5mol/l NaCl

（2）0.4 mol/l Tris·Cl pH7.6 / 2×SSC

（3）2×SSC   10.  将滤膜置于真空烤箱中80℃干烤90~120 min，或者置于42℃的恒温箱中过夜，若暂不做杂交实验，滤膜可用干燥的滤纸夹好，室温保存。

如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。

https://www.aladdin-e.com