辛酸提取法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。

操作方法

辛酸提取法

材料与仪器

动物血清样品
正辛酸 醋酸缓冲液 PBS
透析袋 高速低温离心机

步骤

一、材料和试剂
  1.   正辛酸
  2.  60 mmol/L，pH4.0醋酸缓冲液，PBS
  3.  透析袋
  4.  高速低温离心机
 二、操作步骤
  1.  将待提取样品用60 mmol/L，pH4.0醋酸缓冲液稀释3～4倍，调pH至4.5，对含脂质较高的标本可采用二氧化硅粉或玻璃纤维吸附法除去脂质。
  2.  在室温下边搅拌边缓慢加入正辛酸，按每ml样品中加25 μl，若样品体积小于5 ml，则每ml样品内加入30 μl正辛酸，搅拌30 min。
  3. 10 000×g离心30 min，取上清液通过定性滤纸过滤，装人透析袋，用20倍体积的PBS，4℃透析过液，中间换液3～4次。
  4.  然后每毫升混合液加0.27 g硫酸铵，搅拌30 min。
  5.  以5 000 g离心15 min，收集沉淀物，溶于少量PBS中，再以15 000×g离心20 min。上清液即为提取的Ig，其中大部分为IgG，约占90%，少量为IgA及IgM，回收率>80%。整个操作可在24 h内完成。

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