本实验来源「实用流式细胞术彩色图谱」 王书奎、周振英主编。

操作方法

细胞RNA含量样品的制备及分析

材料与仪器

单细胞悬液
PY 试剂 醋酸缓冲液 磷酸缓冲液 DNA 酶消化液

步骤

一、试剂配制

1. PY 试剂的配制：PY 1.0 g 以 100 ml 蒸馏水溶解，配成母液，置 4℃ 冰箱保存。PY 工作液：取 1 ml PY 母液，加入 1 mol/L pH 4.7 的醋酸缓冲液 100 ml，稀释为 0.01% 的浓度。

2. 1.0 mol/L pH 4.7 醋酸缓冲液的配制：冰醋酸 11.55 ml 加蒸馏水至 1000 ml；无水醋酸钠 16.4 g 加蒸馏水至 1000 ml；分别取上述两种液体 255 ml 和 245 mI，再加入 200 ml 蒸馏水即成。

3. 配制 pH 7.2 的磷酸缓冲液。

4. DNA 酶消化液的制备：DNA 酶 0.05 mg/ml，0.25 mol/L 枸橼酸，2.5 mol/L TrisHCl，调 pH 为 6.0。

二、染色程序

1. 制备单细胞悬液，浓度为 1x10⁶/ml。

2. 加入 DNA 酶液 0.5 ml，37℃，消化 20 min，弃去 DNA 酶。

3. 加入 0.01% 的 PY 工作液 1.0 ml，室温下染色 30 min，离心沉淀（800 r/min 离心 5 min）。

4. 去染色液，以 PBS 液洗 3 次，再加入 1.0 ml PBS，上机检测。

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