本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

操作方法

用渗透溶胀法从HeLa细胞悬浮培养物中制备细胞核

材料与仪器

HeLa 细胞
Earle’s 平衡盐溶液 RSB
玻璃盖玻片

步骤

1. 悬浮培养出 HeLa 细胞，600 g 离心 5 分钟收集细胞。

2. 沉淀细胞用 5 倍体积 4℃ 预冷的 Earle’s 平衡盐溶液重新悬浮。

3. 重悬浮的细胞在 4℃，600 g 离心 5 分钟，或者如步骤 1 所说加以延长。

4. 用 10 倍体积的 RSB 重悬浮洗过的细胞沉淀，使离心管在冰上放置 10 分钟。

RSB：

0.1 mol/L NaCl

1.5 mmol/L MgCl₂

0.01 mol/L Tris-HCl ( pH 7.4)

5. 将一巴斯德吸管头伸入细胞悬液 0.5~0.75 cm，通过虹吸作用取少量细胞涂到一载玻片上。

6. 其上覆盖一块 22 mm² 的玻璃盖玻片，在相差显微镜下检查细胞。

7. 将膨胀的细胞吸到预冷的玻璃 Dounce 匀浆器中。

8. 快速向上抽出研杵 10~12 次，破碎细胞。

9. 取少量细胞悬液在相差显微镜下观察（具体步骤与第 6 步相同）。

10. 细胞悬液的匀浆产物中游离细胞核与完整细胞的比例达到或超过 9.0 后，将悬液在 4℃，1000 g 离心 3 分钟以沉淀细胞核。

11. 用一装有橡胶吸球的巴斯德吸管吸去上清，再用一干净的巴斯德吸管将细胞核沉淀重新悬浮于 10 倍体积的 RSB 中。

12. 按照第 10 步的方法离心细胞核，再用 10 倍体积的 RSR 重悬浮。

13. 重复第 12 步。

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