本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

操作方法

用活化剂裂解方法从悬浮培养的HeLa细胞中制备细胞核

材料与仪器

HeLa 细胞
TM-2 缓冲液
塑料离心瓶 Corex 管

步骤

1. 转瓶培养 4 升 HeLa 细胞，便细胞浓度达到 1.0x10⁶ 细胞/ml。

2. 细胞在 1 L 的塑料离心瓶中，用 Sorvall 的 RC-3B 离心机，H-600A 转头，3000 r/min 离心 5 分钟。

3. 在 30 ml 的 Corex 管中，用 10 ml 冰预冷的 PBS 清洗各细胞沉淀。

4. 细胞沉淀用 10 ml TM-2 缓冲液重悬浮，室温孵育 1 分钟。

TM-2 缓冲液：

0.01 mol/L Tris-HCl ( pH 7.4)

0.002 mol/L MgCl₂

0.0005 mol/L PMSF（临用前添加）

5. 将装有 TM-2 悬浮液的试管放到一个含冰水的烧杯中冰浴 5 分钟。

6. 加入 Tritron X-100 至终浓度为 0.5%，再冰浴 5 分钟。

7. 3 次通过 22 号针头剪切细胞。

8. 取 5 μl 加到一 22 mm² 的玻璃盖玻片上，在相差显微镜下检查细胞核。

9. 用 Sorvall 的 RC-5B 离心机，SS-34 转头在 4℃，800 r/min 离心 10 分钟，将细胞核从胞质中分离出来。

10. 用 10 ml TM-2 缓冲液清洗两遍细胞核。

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